抗CD147人源单链抗体的筛选及生物特性初步鉴定
刘妍1
陈秀秀2
王欲晓3
丁立4
付凯飞3
周丽君3
1.510630广州,南方医科大学第三临床医学院;100048北京,海军总医院中心实验科2.100048北京,海军总医院中心实验科;230032 合肥,安徽医科大学海军临床学院3.海军总医院中心实验科,北京,1000484.南方医科大学第三临床医学院,广州,510630
摘要：目的 利用噬菌体展示技术筛选特异性抗CD147人源单链抗体(human anti-CD147 scFvs)并进行生物特性鉴定.方法 以真核表达的CD147蛋白为抗原,采用“酸洗脱法”对库进行4轮富集性筛选、以ELISA法对筛选克隆的结合活性进行测定,以竞争ELISA和Western blot实验对获得的噬菌体抗体和可溶性scFv的特异性进行鉴定,通过DNA测序核实特异性scFvs的人源性及其亚群,以硫氰酸盐洗脱法对获得的抗体进行相对亲和力分析.结果 经过4轮的富集性筛选,共筛出4个与CD147特异性结合的阳性克隆,其中3个获得可溶性表达,竞争抑制及Western blot实验证实其能与CD147特异性结合.DNA序列分析证实3个阳性克隆具有不同的基因型,三者的轻链可变区分别属于VλⅠ、VκⅡ、VλⅢ亚群,重链可变区分别属于VHⅠ、VHⅢ、VHⅢ亚群.硫氰酸盐洗脱法测出13号、15号和168号3个human anti-CD147 scFvs的亲和力分别为0.20 mol/、0.35 mol/L和0.6 mol/L.结论 成功从大容量噬菌体抗体库中筛选到特异性human anti-CD147 scFvs,为进一步研究该抗体的功能及应用前景奠定了基础.
关键词：噬菌体展示技术CD147单链噬菌体抗体
分类号：R392.11(医学免疫学)R392-33(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(81273311)国家自然科学基金(31470897)医药卫生重点课题(BHJ14J004)
论文发表日期：2018-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 59-64 )
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