重组金黄色葡萄球菌疫苗免疫血清中功能性抗体OPK检测方法的建立
周恒
杨柳扬
杨峰
章金勇
邹金桃
程平
曾浩
邹全明
1.陆军军医大学药学与检验医学系微生物与生化药学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心,重庆,4000382.陆军军医大学药学与检验医学系微生物与生化药学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心,重庆,4000383.陆军军医大学药学与检验医学系微生物与生化药学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心,重庆,4000384.陆军军医大学药学与检验医学系微生物与生化药学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心,重庆,4000385.陆军军医大学药学与检验医学系微生物与生化药学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心,重庆,4000386.陆军军医大学药学与检验医学系微生物与生化药学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心,重庆,4000387.陆军军医大学药学与检验医学系微生物与生化药学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心,重庆,4000388.陆军军医大学药学与检验医学系微生物与生化药学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心,重庆,400038
摘要：目的 建立重组金黄色葡萄球菌疫苗免疫血清中功能性抗体检测方法.方法 在参考美国阿拉巴马大学的多重调理吞噬实验(UAB-MOPA)方法的基础上,构建并鉴定HL-60效应细胞库及金黄色葡萄球菌工作种子批,完成补体浓度、调理和吞噬孵育时间及血清预稀释倍数等关键实验参数的优选.在此基础上对5种不同来源金黄色葡萄球菌进行调理吞噬杀菌(OPK)活性的检测.结果 HL-60细胞经0.8％ DMF诱导分化4d后,CD35表达量为87.1％,CD71表达量为2.82％,活细胞比例为75.7％;靶细菌工作种子批冻存复活率＞90％,工作稀释度＞1 000;体系中补体终浓度确定为6％;选择30 min、60 min作为调理和吞噬孵育时间;血清预稀释倍数为2倍;疫苗免疫血清对5种不同来源的金黄色葡萄球菌均表现出良好的OPK活性及标准的“S”型杀菌曲线.结论 本研究优化建立的OPK检测方法,可有效评价重组金黄色葡萄球菌疫苗的体外功能性抗体水平,为疫苗临床试验样本检测及免疫有效性替代终点的确立提供了重要的技术支撑.
关键词：金黄色葡萄球菌重组蛋白疫苗功能性抗体调理吞噬杀菌实验
分类号：R-331(实验医学、医学实验)
资助基金：国家自然科学基金(31370932)
论文发表日期：2018-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 252-258 )
英文信息