利用CRISPR/Cas9技术制备TCR Ⅴ基因敲除小鼠
刘耀1
周建奎2
王晨辉1
唐小琴1
董惠1
尚小云1
吴玉章1
1.陆军军医大学全军免疫研究所,重庆,4000382.上海科技大学生命科学与技术学院,201210
摘要：目的 利用CRISPR/Cas9基因组编辑技术建立TCR Ⅴ基因敲除小鼠.方法 针对Trbv13-3、Trbv19基因编码序列分别设计向导RNA (single guide RNA,sgRNA),制备相应质粒,将表达sgRNA和cas9蛋白的质粒用Lipo2000转染进小鼠成神经瘤细胞N2A中,通过药物筛选获得细胞库.经过单克隆测序检测细胞库中基因组的突变效率,筛选出效率最佳的sgRNA.体外转录获取sgRNA和Cas9 mRNA,进行小鼠受精卵的显微注射,提取出生的小鼠的基因组DNA进行测序鉴定.结果 6号小鼠Trbv13-3和Trbv19基因各有1个bp的增加和减少,形成移码突变,Trbv13-3和Trbv19基因的表达被破坏.结论 成功构建出Trbv13-3和Trbv19基因敲除小鼠,为深入研究Trbv13-3和Trbv19基因与TCR谱系形成的关系提供了小鼠模型.
关键词：T细胞受体CRISPR/Cas9基因敲除Trbv13-3Trbv19
分类号：R392.1(医学免疫学)
资助基金：重庆市新产品创新青年科技人材培养计划(stc2013kjrc-qnrc10009)
论文发表日期：2018-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 364-368 )
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