基于单个外周血浆细胞技术筛选MRSA人源性单克隆抗体的实验研究
宋振1
王孝丽2
敬海明1
张怡1
刘圆圆1
廖化新2
曾浩1
邹全明1
1.陆军军医大学药学与检验医学系微生物与生化药学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心,重庆,4000382.暨南大学生命科学院细胞生物学系,广州,510000
摘要：目的 建立耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(meticillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)人源性单克隆抗体筛选方法.方法 从52份重组MRSA多价亚单位疫苗的Ⅰ期临床研究受试者血液样本中筛选出抗体滴度高的血样,利用流式细胞术分选其外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中浆细胞,以mRNA为模板PCR扩增抗体重链、轻链可变区基因,通过重叠延伸PCR分别将将抗体重链、轻链可变区基因与CMV启动子、人恒定区及多聚A尾连接,构建成单克隆抗体线性表达载体,PEI瞬时转染293T细胞进行抗体表达.结果 流式细胞术分选出1 120个浆细胞,筛选出了39个针对MRSA 5种保护性抗原α-溶血素(Hla)、铁离子表面决定蛋白B(Isd B)、金葡菌蛋白A(SpA5)、肠毒素B(SEB)及锰离子结合蛋白C(Mnt C)的人源性单克隆抗体,ELISA结果显示抗体能与抗原蛋白结合.结论 通过单个外周血浆细胞技术,成功筛选出了能够与抗原结合的MRSA人源性单克隆抗体,为研究MRSA治疗性人源性抗体奠定了良好基础.
关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌治疗性人源性单克隆抗体筛选与鉴定
分类号：R392-33(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(31370932)
论文发表日期：2019-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 254-261 )
英文信息