表达CTLA4抗体的重组流感病毒构建及溶瘤效果研究
董锁花1
王立朋2
程晋霞3
杨晓岚3
孙芳4
段跃强3
王希良3
包金风1
杨鹏辉4
1.内蒙古医科大学基础医学院,010059 呼和浩特2.中国人民解放军66400部队医院普通外科,100039 北京3.军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所/病原微生物与生物安全国家重点实验室,100071 北京4.解放军总医院第五医学中心,100039 北京
摘要：目的 拯救表达免疫检查点CTLA4抗体的重组流感病毒, 全面鉴定并体内外实验评价其溶瘤效果.方法 利用流感病毒反向遗传学 (reverse genetics, RG) 技术, 以A/Puerto Rico/8/34 (PR8) 为载体, 分别在PR8病毒PB1和PA基因片段插入免疫检查点CTLA4抗体的重链和轻链构建重组质粒pFlu-CTLA4-PB1、pFlu-CTLA4-PA, 与PR8病毒的其余6个质粒pHW191-PB2、pHW194-HA、pHW195-NP、pHW196-NA、pHW197-M、pHW198-NS共转染COS-Ⅰ和MDCK细胞, 经拯救、筛选、鉴定获得重组溶瘤流感病毒, 命名为rFlu-muCTLA4.通过血凝试验、EID50、PCR等方法全面鉴定;ELISA测定anti-CTLA4抗体含量;3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulphophenyl)-2H-tetrazolium 3-(4, 5-二甲基噻唑-2-基)-5 (MTS) 细胞活力测定重组病毒对小鼠肝癌H22细胞的杀伤效果;利用小鼠肝癌模型, 评价重组病毒在体内对肿瘤的抑制效果.结果 rFlu-muCTLA4的血凝效价为29～210, 且能够在鸡胚中稳定传代;EID50为10-8EID50/ml;重组病毒的PB1、PA片段与预期大小一致;重组病毒接种鸡胚培养2 d可检测到anti-CTLA4抗体, 4天达到高峰值.MTS结果显示, rFlu-muCTLA4能特异性杀伤H22细胞活力, 呈现剂量依赖性.动物实验表明, 重组病毒能显著减小小鼠肝癌肿瘤体积, 提高动物存活率并延长存活时间.结论 表达免疫检查点CTLA4抗体的重组流感病毒rFlu-muCTLA4在体内外能靶向杀伤肝癌细胞, 有望为溶瘤病毒靶向治疗肝癌提供新的思路.
关键词：溶瘤病毒免疫检查点抑制剂细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4
分类号：R730.54(一般性问题)
资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）(SS2015AA020924)
论文发表日期：2019-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 444-450 )
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