HSV-TK/CD20双自杀基因系统慢病毒载体的构建及应用
家婷1
张涛2
邹强3
郑武燕4
赵日1
欧阳寒梅3
曹倩3
朱榕3
王茂庆3
叶鑫宇3
刘佳慧4
李华2
1.西南交通大学医学院,成都,6100312.西部战区总医院肿瘤诊治中心,成都,6100833.成都医学院科研实验中心,6105004.成都中医药大学基础医学院免疫学教研室,610072
摘要：目的 构建同时表达单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)和RQR8膜蛋白双自杀可控开关的Jurkat细胞,使之可通过更昔洛韦药物(GCV)或利妥昔单抗(RTX)实现可控性细胞消除.方法 RQR8膜蛋白小分子含利妥昔单抗识别的模拟表位和抗CD34单抗表位.合成编码RQR8及HSV-TK的基因,构建慢病毒共表达载体pLV-RQR8-T2A-TK;脂质体Lipofectamine 3000转染Jurkat细胞,流式荧光抗CD34单抗检测RQR8的表达,通过磁珠筛选获得RQR8+TK+Jurkat细胞;分别加入GCV或RTX检测自杀可控开关功能:CCK8法检测加药后细胞增殖情况,Annexin-V/PI检测细胞凋亡情况.结果 慢病毒载体pLV-RQR8-T2A-TK酶切片段大约1 670 bp,测序进一步证实外源片段插入正确.慢病毒感染Jurkat细胞,感染率为45.21％,磁珠纯化得到99.4％纯度的RQR8+TK+Jurkat.GCV对RQR8+TK+Jurkat具有细胞毒性作用,GCV浓度为40 μmol/L时,其存活率为(52.11±7.04)％,IC50为20.66 μmol/L.80 μmol/L GCV作用RQR8+TK+Jurkat细胞72 h后凋亡率达(41.28±2.78)％.在血清(含补体)存在情况下,320 μg/ml RTX可通过补体介导的细胞杀伤作用杀伤RQR8+TK+JuAm,其存活率为(29.64±4.52)％.结论 双自杀可控开关慢病毒载体pLV-RQR8-T2A-TK构建成功,加入GCV或RTX可通过2种不同路径成功杀伤细胞,达到细胞清除目的,提高了安全性,为临床治疗过继免疫不良反应提供多种选择.
关键词：自杀基因HSV-TKCD20RQR8利妥昔单抗更昔洛韦
分类号：R918(药物设计)
资助基金：四川省科技厅面上项目(19YYJC0242)四川省科技厅应用基础重点项目(2018JY0440)成都军区卫生人才培养对象(4173273)医院研究型人才培养对象(41732536)成都军区十二五重大项目(B14005)
论文发表日期：2019-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 711-717 )
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