胆红素对脂多糖引起的腹膜炎及腹腔免疫细胞功能的影响
姚本来1
姚立鹏1
李晓明1
李芳飘1
吴刚2
1.572000,三亚市人民医院肝胆外科2.110122沈阳,中国医科大学附属第一医院肝胆外科暨器官移植科
摘要：目的 探讨胆红素(bilirubin)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)引起的腹膜炎中腹腔炎性因子分泌,以及腹膜巨噬细胞和Raw264.7细胞功能的影响.方法 构建LPS诱导的小鼠腹膜炎模型,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定小鼠腹腔灌洗液上清液中炎性因子(IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-6)的含量;分离培养小鼠腹膜巨噬细胞并进行分组处理,培养Raw264.7细胞进行分组处理.采用MTT法检测不同处理的腹膜巨噬细胞与Raw264.7细胞的活性;实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测不同处理的腹膜巨噬细胞与Raw264.7细胞中Nlrp3和IL-1β mRNA的表达情况;免疫印迹法(Western blot)检测不同处理的腹膜巨噬细胞中Nlrp3、IL-1β和caspase-1蛋白表达,Raw264.7细胞中Nlrp3、IL-1β、IκBα和p-p65蛋白表达,以及Raw264.7胞质与胞核中p50、p65和p-p65蛋白表达水平;免疫荧光染色检测p-p65蛋白在不同处理的Raw264.7细胞胞质与胞核中的表达情况.结果 在LPS诱导的小鼠腹膜炎模型中,注射胆红素的小鼠腹腔灌洗液中IL-2、IL-4、IL-6和IFN-γ的含量明显降低.10 μmol/L胆红素处理腹膜巨噬细胞后对细胞活性无影响;10 μmol/L胆红素预处理可以显著抑制脂多糖诱导的腹膜巨噬细胞中Nlrp3、IL-1β mRNA和Nlrp3、IL-1β、caspase-1蛋白的表达.5μmol/L、10 μmol/L胆红素处理Raw264.7细胞后对细胞活性无影响;胆红素呈剂量依赖性地抑制脂多糖诱导的Raw264.7细胞中Nlrp3、IL-1β mRNA和蛋白表达水平,并抑制IκBα蛋白表达降低与p-p65蛋白表达升高;10 μmol/L胆红素预处理抑制了脂多糖诱导的Raw264.7细胞核中p50、p65和p-p65蛋白表达升高以及p-p65从细胞质向细胞核的转移.结论 胆红素可抑制脂多糖引起小鼠腹膜炎中腹腔灌洗液中炎性因子的分泌,并抑制腹膜巨噬细胞和Raw264.7细胞中Nlrp3炎性体活化,该作用可能是通过抑制NF-κB通路激活实现的.
关键词：胆红素腹膜炎腹膜巨噬细胞Raw264.7细胞Nlrp3
分类号：R965(药理学)
论文发表日期：2020-08-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 662-669 )
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