靶向CD96/PD1双特异性抗体的构建与鉴定
马佳兵1
赵文旭2
徐艳敏2
沈俊杰3
陈雪娇2
田茂鲜2
钱程4
1.310018杭州,浙江理工大学生命科学与医药学院;400030,重庆精准生物产业技术研究院有限公司2.400030,重庆精准生物产业技术研究院有限公司3.400030,重庆精准生物技术有限公司4.400030,重庆大学附属肿瘤医院精准医学研究中心
摘要：目的 构建可以同时靶向免疫检查点分子CD96和PD1(programmed cell death protein 1)的双特异性抗体,为肿瘤免疫治疗提供一种新的思路.方法 构建表达抗CD96和PD1的ScFv-Fc结构的质粒,使用CHO真核表达系统生产抗体.经过Protein A纯化后,使用SDS-PAGE和分子排阻色谱鉴定抗体.外源构建CHO-PD1和293T-CD96 2种靶细胞,流式细胞术检测CD96和PD 1的ScFv-Fc抗体与上述靶细胞以及T细胞上抗原的结合能力,并采用Fortebio分子互作仪进行抗原抗体结合解离动力学验证.分别采用Knobs-into-holes(KIH)突变策略构建ScFv-KIH双特异性抗体结构,以及类DVD-Ig(Dual variable domain immunoglobulin)分子结构,构建ScFv串联型(ScFv)2-Fc结构的双特异性抗体,并分别对表达的2种双特异性抗体进行了功能验证.结果 抗CD96和PD1的ScFv-Fc抗体可特异性识别靶细胞和T细胞上的靶抗原,构建生产的2种结构的双特异性抗体均能正常表达,且能同时靶向CD96和PD1 2种抗原.结论 ScFv-KIH和(ScFv)2-Fc型的双特异性抗体表达成功,并可同时识别CD96和PD1抗原.
关键词：CD96PD1双特异性抗体肿瘤免疫治疗Knobs-into-holes
分类号：R730.3(一般性问题)
资助基金：国家科技部科技助力经济重点专项(SQ2020YFF0401839)
论文发表日期：2022-03-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 269-276 )
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