沉默HDAC6对嗜肺军团菌干扰RAW264.7自噬作用的影响
贺瑞霞1
曹秀琴2
杨晓辰1
杨志伟1
1.750004,宁夏医科大学基础医学院病原生物学与医学免疫学系2.750004,宁夏医科大学基础医学院病生育力保持省部级共建教育部重点实验室
摘要：目的 以嗜肺军团菌感染HDAC6基因沉默的RAW264.7细胞为研究对象,检测自噬流及自噬相关因子表达水平的变化,探究HDAC6在嗜肺军团菌干扰巨噬细胞自噬中的作用机制.方法 利用RNAi技术介导基因沉默,构建shRNA-HDAC6细胞,Western blot验证沉默效果.用嗜肺军团菌活菌和灭活菌[感染复数(MOI)=50]分别感染RAW264.7、sh-NC、shRNA-HDAC6细胞6、12、24h.应用自噬双标质粒pmCherry-Cl-EGFP-LC3B检测巨噬细胞自噬流的变化;透射电镜观察嗜肺军团菌感染24 h后各组细胞内的自噬小体和自噬溶酶体;实时荧光定量PCR及Western blot法检测AMBRA1、ATG9B、P62、Beclin1、α-tubulin、LC3B的表达水平.结果 与RAW264.7对照组相比,shRNA-HDAC6细胞的HDAC6蛋白表达水平显著降低(P＜0.05);自噬双标质粒检测自噬流结果显示,嗜肺军团菌活菌及灭活菌感染RAW264.7细胞,自噬流均减弱,沉默HDAC6后嗜肺军团菌感染巨噬细胞自噬流增加.透射电镜可观察到嗜肺军团菌感染巨噬细胞24 h各组的自噬小体及自噬溶酶体.实时荧光定量PCR及Western blot检测结果显示,与RAW264.7对照组相比,嗜肺军团菌感染RAW264.7细胞后,ATG9B、α-tubulin、P62的表达水平均明显增加(P＜0.05),LC3B、Beclinl和AMBRA1的表达水平均明显下调(P＜0.05);与shRNA-HDAC6对照组相比,嗜肺军团菌感染shRNA-HDAC6细胞后,α-tubulin的表达水平明显下降(P＜0.05).结论 嗜肺军团菌可抑制巨噬细胞的自噬,沉默HDAC6后嗜肺军团菌对巨噬细胞自噬的抑制作用减弱,自噬流增加,提示嗜肺军团菌可能通过与HDAC6相互作用而影响微管蛋白乙酰化及细胞应激等,进而干扰巨噬细胞的自噬.
关键词：嗜肺军团菌巨噬细胞自噬HDAC6
分类号：R392.12(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(82060362)
论文发表日期：2022-07-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：10( 553-562 )
英文信息