ZZ domain和APEX2融合蛋白的制备和应用
黄润庆1
傅炀1
邓艳红2
1.510655广州,中山大学附属第六医院广东省胃肠病学研究所2.510655广州,中山大学附属第六医院肿瘤内科
摘要：目的 基于免疫球蛋白结合结构域ZZ domain和过氧化物酶APEX2的融合表达,开发一种可以特异性结合免疫球蛋白且具有过氧化氢酶催化活性的新型免疫亲和检测试剂.方法 将ZZ domain和APEX2融合表达蛋白——ZZ-APEX2在BL21(DE3)大肠杆菌进行大量表达,并利用IBA公司的strep-Tactin纯化系统进行纯化.通过点印迹和Western blotting检测ZZ-APEX2催化过氧化氢分解并启动鲁米诺发光反应的能力.通过愈创木酚比色法测定ZZ-APEX2的过氧化氢酶活性.结果 ZZ-APEX2可以在大肠杆菌中可溶性表达,而且可以通过strep-Tactin系统纯化获取.ZZ-APEX2在室温保存48 h和在-20℃保存2个月均保持着稳定的过氧化氢酶活性,并可以用于Western blotting实验.通过双倒数法作图发现,与常规羊抗兔IgG-HRP和羊抗鼠IgG-HRP二抗相比,ZZ-APEX2具有更大的Kcat(s-1)值.结论 成功开发了一种分子量小、特异性好、容易大量生产、无需实验动物和繁琐的HRP蛋白提纯步骤的新型免疫亲和检测试剂.
关键词：ZZ domainAPEX2免疫亲和检测试剂
分类号：R392-33(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(81974369)广东省自然科学基金面上项目(2019A1515010071)
论文发表日期：2022-07-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 639-644 )
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