新型冠状病毒特异性纳米抗体的筛选和鉴定
史震中1
徐晓驰2
吴文惠2
许剑锋3
1.201306,上海海洋大学食品学院2.201306,上海海洋大学食品学院;201306上海,农业部水产品贮藏保鲜质量安全风险评估实验室(上海)3.201306,上海海洋大学食品学院;201306上海,农业部水产品贮藏保鲜质量安全风险评估实验室(上海);226200,启东凯默纳米生物医药有限公司
摘要：目的 通过噬菌体展示技术,从骆驼外周血中筛选针对SARS-CoV-2RBD结构域的特异性纳米抗体,并对纳米抗体的亲和力、结合表位和中和活性进行评估.方法 利用重组RBD免疫骆驼,从骆驼外周血中分离淋巴细胞,提取RNA并逆转录为cDNA,接着通过巢式PCR扩增VHH基因,电转化至pMECS噬菌粒载体中,构建噬菌体展示抗体库并进行免疫淘选,鉴定可以与RBD特异性结合的纳米抗体.分别利用Octet Red96e和HPLC测定纳米抗体与重组RBD的亲和力和结合表位,通过SARS-CoV-2假病毒中和实验测定纳米抗体的中和活性.结果 从外周血淋巴细胞中成功扩增出VHH基因,构建的噬菌体展示抗体库库容为1.33×108 CFU/ml;经过2轮免疫淘选,鉴定出2株特异性纳米抗体——NB2D11和NB4E9,KD值分别为2.21和0.31 nmol/L;NB2D11和NB4E9具有非竞争性的结合表位,中和SARS-CoV-2假病毒的1C50值分别为340.7和35.5 nmol/L.结论 筛选到的2株高亲和力特异性纳米抗体可以有效地地阻断SARS-CoV-2假病毒与ACE2的结合,为COVID-19的诊断和治疗奠定了基础.
关键词：SARS-CoV-2RBD噬菌体展示技术纳米抗体
分类号：R392-33(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(82173731)
论文发表日期：2022-08-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 720-725 )
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