异烟肼耐药结核病体外巨噬细胞模型的诱导与构建
庞慧1
魏林2
王家超2
郭旭霞1
闫林芳1
徐慧美1
弓艳娥1
马翠卿2
1.046000,长治医学院医学检验学系2.050017石家庄,河北医科大学免疫学教研室
摘要：目的 运用浓度梯度倍增的异烟肼体外诱导获得BCG耐药菌株,并构建体外BCG感染巨噬细胞模型.方法 选取野生型BCG,从1/8最低抑菌浓度开始,在异烟肼浓度倍增的7H9培养基上进行传代培养,逐步诱导菌株对异烟肼的耐药性;采用微量肉汤稀释法,进行BCG药敏实验;通过耐药基因测序来验证耐药诱导是否成功;通过PMA刺激Thp1细胞,诱导分化成M0巨噬细胞;运用CCK实验,进行BCG感染巨噬细胞的细胞活性测定;通过流式细胞术分析野生型BCG或异烟肼耐药BCG感染巨噬细胞的极化状态.结果 野生型BCG的MIC值为0.125 μg/ml,异烟肼耐药BCG的MIC值＞128 μg/ml;异烟肼耐药基因inhA和katG测序后比对发现,inhA有T→G突变,katG有A→T突变;CCK实验确定合适的感染复数(multiplicity of infection,MOI)为=10;异烟肼耐药BCG较野生型BCG感染巨噬细胞后,其向M1型极化减少.结论 采用异烟肼浓度梯度倍增方式,成功诱导了耐药BCG;确定了耐药BCG感染巨噬细胞的感染复数,为研究体内异烟肼耐药结核病提供了良好的体外细胞模型.
关键词：结核病异烟肼耐药性巨噬细胞体外实验
分类号：R378.91(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：山西省基础研究计划项目(20210302124326)山西省卫生健康委科研课题(2021005)河北省重点研发计划(20377716D)山西省高校科技创新项目(201802092)长治医学院学术技术带头人项目(XSQ201901)国家级大学生创新创业训练计划项目(20210541)
论文发表日期：2022-11-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 936-943 )
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