L929细胞上清诱导小鼠骨髓巨噬细胞脓毒症耐受模型的建立与鉴定
刘思佳1
张亮1
刘鑫2
蒋青松1
杨婷1
时新惠1
钟佩伶1
袁烈1
黄施群1
李小丽1
1.400016,重庆医科大学药学院药理系;400016,重庆医科大学药学院药物代谢研究重庆重点实验室2.400038 重庆,陆军军医大学西南医院临床研究中心
摘要：目的 采用L929细胞培养上清分化小鼠骨髓巨噬细胞(BMDMs)建立脓毒症脂多糖(LPS)耐受模型.方法 收集L929细胞培养上清,诱导BMDMs分化成熟后,使用显微镜观察BMDMs形态,流式细胞仪鉴定BMDMs纯度及成熟度.采用5 ng/ml LPS预处理分化成熟的BMDMs 4 h后,使用100 ng/ml LPS再处理6 h以建立脓毒症LPS耐受模型.采用ELISA法检测BMDMs耐受模型细胞上清中IL-6及TNF-α释放水平;利用qRT-PCR和Western blot方法检测BMDMs耐受模型细胞中IL-6、TNF-α、TLR4、MyD88和NF-κB p65 mRNA和蛋白表达.结果 研究结果表明L929上清中M-CSF因子在第6天释放水平最高;L929上清诱导BMDMs 6 d后细胞分化成熟呈梭形,加入M-CSF阻断剂后细胞未分化;使用F4/80标记分化成熟的BMDMs,阳性率为96.9％;LPS能够剂量及时间依赖性增加分化成熟的BMDMs中IL-6及TNF-α释放水平;在BMDMs、小鼠腹腔巨噬细胞(PMs)、RAW264.7细胞LPS耐受模型中,其耐受组的IL-6及TNF-α释放水平均有不同程度的降低;qRT-PCR及Western blot实验结果均表明在耐受组中IL-6、TNF-α、TLR4、MyD88、NF-KB表达水平显著下调.结论 本研究利用L929上清成功诱导BM-DMs分化,并建立LPS耐受模型,且LPS诱导BMDMs建立的耐受模型是长期实验的最佳模型,此研究为脓毒症免疫抑制作用及机制提供了理想的细胞模型.
关键词：脓毒症免疫抑制内毒素耐受巨噬细胞骨髓巨噬细胞
分类号：R392-3(医学免疫学)
论文发表日期：2023-08-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 654-661 )
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