基于CRISPR/Cas9技术构建IDO1基因敲除的THP-1细胞株及其表型研究
李雪银1
吴传新2
刘慧玲1
李丽1
程莎1
孙航1
1.401336,重庆医科大学附属第二医院感染科重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆医科大学病毒性肝炎研究所2.401336,重庆医科大学附属第二医院肝胆外科
摘要：目的 采用CRISPR/Cas9技术构建吲哚胺-2,3-双加氧酶1(IDO1)基因敲除的THP-1细胞株,为研究IDO1在巨噬细胞中的作用提供细胞模型.方法 设计靶向IDO1基因的3条向导RNA(guide RNA,gRNA),分别构建IDO1-gRNA重组质粒,酶切及测序鉴定后,包装成Lenti-IDO1-gRNA慢病毒.利用Cas9慢病毒感染THP-1细胞获得稳定表达Cas9蛋白的细胞株,再经Lenti-IDO1-gRNA慢病毒感染敲除IDO1基因,有限稀释法获得单克隆细胞株.T7E1酶切检测gRNA打靶效率,PCR产物测序和Western blot鉴定IDO1基因敲除效果.CCK8法检测IDO1基因敲除对THP-1细胞增殖活性的影响,流式细胞术检测对巨噬细胞标志物CD11b、CD68和CD14表达的影响,中性红法检测巨噬细胞吞噬功能.结果 成功构建了3种IDO1-gRNA重组质粒,3条gRNA均能有效编辑IDO1基因,以gRNA2编辑效率最高.经PCR产物测序和Western blot验证获得了 3株THP-1 IDO1-KO单克隆细胞株,并发现IDO1基因敲除可抑制THP-1细胞增殖,下调THP-1巨噬细胞CD11b、CD68表达,上调CD14表达,增强THP-1巨噬细胞吞噬功能.结论 成功构建IDO1基因敲除的THP-1细胞株;IDOL对THP-1细胞增殖活性、分化调节以及THP-1巨噬细胞吞噬功能调节有重要作用,为后续进一步探讨IDO1基因在巨噬细胞中的功能及机制研究奠定基础.
关键词：CRISPR/Cas9吲哚胺-23-双加氧酶1基因敲除THP-1细胞巨噬细胞
分类号：R392.12(医学免疫学)
资助基金：重庆市研究生科研创新项目(CYS22344)
论文发表日期：2024-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：9( 87-95 )
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