头孢他啶通过miR-218-5p调控Nfr2/HO-1信号通路对LPS诱导的慢性支气管炎大鼠模型气道炎症和阻塞的改善作用

王梦迪; 丁浩

doi:10.13431/j.cnki.immunol.j.20240091

摘要：目的研究头孢他啶通过调控微小RNA-218-5p(miR-218-5p)介导核因子E2-相关因子2(Nfr2)/血红素加氧酶1(HO-1)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的慢性支气管炎(CB)大鼠的改善作用.方法在动物水平上,采用气管内注射LPS构建CB模型.将40只大鼠随机分为对照组、模型组、头孢他啶组(肌肉注射头孢他啶200 mg·kg-1)、头孢他啶+miR-218-5p inhibitor组(肌肉注射头孢他啶200 mg·kg-1+尾静脉注射miR-218-5p inhibitor 100 nmol·ml-1),每组10只,各组给药每天2次,连续3 d.苏木精-伊红染色法(HE)检测大鼠肺部组织病理学;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-218-5p表达;进行气道阻力(RI)检测;酶联免疫吸附法(ELISA)检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症介质水平;免疫荧光检测黏蛋白5AC(MUC5AC)、黏蛋白5B(MUC5B)阳性表达;蛋白免疫印迹检测Nfr2/HO-1通路相关蛋白表达.细胞水平上,参照动物水平进行分组,其中头孢他啶组采用10 μmol/L头孢他啶处理,头孢他啶+miR-218-5p inhibitor组采用10 μmol/L头孢他啶+10 μmol/L miR-218-5p inhibitor处理.通过双荧光素酶实验、qRT-PCR、ELISA分别检测各组Nrf2、miR-218-5p、HO-1靶向关系、mRNA表达水平及抗氧化水平.结果动物实验表明,对照组、模型组、头孢他啶组miR-218-5p水平分别为1.00±0.17、0.33±0.06、0.72±0.14;对照组、模型组、头孢他啶组、头孢他啶+miR-218-5p inhibitor组RI分别为(0.23±0.03)、(0.62±0.08)、(0.47±0.06)、(0.59±0.08)cmH2O·s·ml-1;IL-6水平分别为(93.84±18.44)(231.16±46.98)(167.89±32.42)、(204.48±40.39)pg·ml-1;TNF-α水平分别为(9.06±1.73)、(44.03±8.17)、(31.41±6.72)、(39.15±7.13)pg·ml-1;巨噬细胞炎症蛋白1α水平分别为(724.32±133.82)、(1 481.18±225.13)、(1 007.50±196.69)、(1 226.76±207.27)pg·ml-1;趋化因子C-C基序配体5水平分别为(166.07±33.61)、(584.20±94.93)、(322.55±57.34)、(463.89±84.04)pg·ml-1;MUC5AC阳性率分别为(31.34±5.86)%、(75.48±10.99)%、(58.11±8.71)%、(68.02±9.82)%;MUC5B阳性率分别为(29.62±5.90)%、(69.45±9.33)%、(48.27±8.07)%、(56.85±9.04)%;Nfr2水平分别为1.00±0.18、0.67±0.13、1.36±0.26、0.94±0.15;HO-1水平分别为1.00±0.19、0.52±0.12、0.93±0.15、0.79±0.13;以上指标模型组与对照组、头孢他啶组与模型组、头孢他啶+miR-218-5p inhibitor组与头孢他啶组比较,差异均具有统计学意义(均P<0.05).在细胞水平上,对照组、模型组、头孢他啶组、头孢他啶+miR-218-5p inhibitor的HO-1 WT荧光素酶活性分别为1.00±0.16、0.48±0.07、0.78±0.10、0.65±0.09,头孢他啶组、头孢他啶+miR-218-5p inhibitor组中的Nrf2、miR-218-5p、HO-1mRNA及Nrf2、HO-1蛋白表达水平均高于模型组,且头孢他啶组水平高于头孢他啶+miR-218-5p inhibitor组.与模型组比较,头孢他啶组、头孢他啶+miR-218-5p inhibitor组抗氧化水平升高,且头孢他啶组高于头孢他啶+miR-218-5p inhibitor组,以上差异均具有统计学意义(均P<0.05).结论头孢他啶可上调Nfr2,诱导miR-218-50表达,进而激活Nfr2/HO-1信号通路,改善LPS诱导的CB大鼠的气道炎症及阻塞.