肾脏特异性ALR基因敲除小鼠模型的制备及ALR对肾纤维化的影响
黄丽利1
马怡欣1
谭方彦1
杨鹏飞1
刘杞2
张玲1
廖晓辉1
1.400010,重庆医科大学附属第二医院肾内科2.400010,重庆医科大学附属第二医院病毒性肝炎研究所
摘要：目的 利用Cre/loxp基因敲除技术构建肾脏特异性肝再生增强因子(ALR)基因敲除小鼠,为研究ALR基因在肾脏中的生物学功能提供重要的动物模型,并初步探讨了肾脏特异性ALR敲除对小鼠肾脏纤维化的影响.方法 将ALRflox/flox小鼠与肾脏肾小管特异性表达Ggt1重组酶的小鼠进行交配和鉴定,筛选出子代中ALRflox/+/Ggt1-Cre小鼠,再与ALRflox/flox小鼠进行交配并鉴定,获得ALRflox/flox/Ggt1-Cre小鼠,将ALRflox/flox/Ggt1-Cre小鼠与ALRflox/flox/Ggt1-Cre小鼠进行交配,其子代基因型为ALRflox/flox/Ggt1-Cre的小鼠即为本实验所构建的肾脏特异性ALR敲除小鼠,ALRflox/flox小鼠即为对照小鼠.提取小鼠鼠尾基因组DNA,通过PCR鉴定子代小鼠的基因型;提取小鼠肾脏和肝脏中的总蛋白,利用Western blot技术和Real-Time PCR技术分别检验ALR在小鼠肾脏组织中总蛋白和mRNA的表达情况;使用免疫组化检测ALR在小鼠肾脏中的表达;对小鼠肾脏进行苏木精-伊红、PAS和Masson染色,分析组织病理变化;流式、免疫荧光、免疫组化、Real-Time PCR分别分析小鼠肾脏组织巨噬细胞浸润情况.结果 Real-Time PCR结果表明制备出的小鼠基因型符合ALRflox/flox/Ggt1-Cre;肾脏特异性ALR基因敲除小鼠肾脏组织中ALR蛋白的表达水平显著低于ALRflox/flox型小鼠;与对照组相比,肾脏特异性ALR基因敲除小鼠肾间质炎症细胞增加,肾小管基底膜断裂,刷状缘脱落更明显,小鼠间质纤维化明显;肾脏特异性ALR基因敲除后,小鼠肾脏组织巨噬细胞浸润增加,巨噬细胞M1向M2极化进程减缓.结论 本研究利用Cre/Loxp技术成功构建了肾脏特异性ALR基因敲除小鼠,为在动物水平上研究ALR基因在肾脏中的作用提供了重要的动物模型,且肾脏特异性敲除ALR后,促进了小鼠肾脏纤维化的发展.
关键词：肝再生增强因子肾脏基因敲除肾脏纤维化巨噬细胞极化
分类号：R692.5(泌尿科学（泌尿生殖系疾病）)
资助基金：国家自然科学基金(81873604)重庆市自然科学基金面上项目(CSTB2024NSCQ-MSX0183)
论文发表日期：2024-08-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 679-685 )
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