墓头回提取液通过抑制NF-κB信号通路调节LPS体外诱导的巨噬细胞活化及体内诱导的炎症反应
胡新新1
赵丽2
谢英华1
韩曦瑶1
刘熠晗1
王秋云1
周佳楠1
闻梦静1
1.200240,复旦大学附属上海市第五人民医院血液科2.730000,兰州大学第一医院临床细胞分子遗传与免疫检验室
摘要：目的 探究药用植物墓头回(MTH)提取物是否通过抑制核因子κB(NF-κB)信号通路调节脂多糖(LPS)体外诱导的巨噬细胞活化及体内诱导的炎症反应.方法 细胞水平研究:将RAW264.7细胞分为6组,即对照组、LPS组、LPS+地塞米松(DEX)组、LPS+MTH(低、中、高剂量)组,其中LPS组、LPS+DEX组、LPS+MTH组细胞加入终质量浓度100 ng/ml LPS诱导,LPS+DEX组额外加入DEX(终质量浓度5.0 ng/ml),LPS+MTH组额外加入MTH提取物(终质量浓度0.1、0.2和0.4 mg/ml).用CCK-8法检测细胞活性,用Transwell检测细胞侵袭,用流式细胞术检测细胞凋亡,用实时荧光定量PCR及酶联免疫吸附实验分别检测白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-17(IL-17)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达及分泌水平,用Griess法检测细胞一氧化氮(NO)的水平,用流式细胞染色实验检测总活性氧(ROS)水平,用蛋白质免疫印迹实验检测p65和核因子κB抑制蛋白(IκB)磷酸化水平,用荧光素酶报告基因实验检测NF-κB转录活性.动物水平研究:将大鼠50只随机分5组,10只/组,即对照组、LPS组、LPS+DEX组、LPS+MTH低剂量组(6 g/kg)、LPS+MTH高剂量组(24 g/kg).将LPS注射至大鼠整个肺部,于建模前36 h、24 h、12 h和建模后12 h、24 h各组分别灌胃给药.末次给药12 h,取肺泡灌洗液,检测肺泡灌洗液的IL-6、IL-17、TNF-α及NF-κB信号通路相关指标.结果 细胞水平研究:与对照组比,LPS组细胞活性、侵袭、凋亡、IL-6、IL-17和TNF-αmRNA及蛋白、NO、ROS、p65蛋白S536位点和IκB蛋白S32位点磷酸化水平、NF-κB转录活性均明显增高(均P＜0.05),与LPS组比,3个LPS+MTH组的细胞活性、侵袭、IL-6、IL-17和TNF-α mRNA及蛋白、NO、ROS、p65蛋白S536位点和IκB蛋白S32位点磷酸化水平、NF-κB转录活性均明显降低(均P＜0.05),凋亡明显增高(均P＜0.05),以上指标均呈MTH剂量依赖性趋势.动物水平研究:与对照组比,LPS组IL-6、IL-1 7、TNF-α、p65蛋白S536位点和IκB蛋白S32位点磷酸化水平均明显增高(均P＜0.05),与LPS组比,2个LPS+MTH组的IL-6、IL-17、TNF-α、p65蛋白S536位点和IκB蛋白S32位点磷酸化水平均明显降低(均P＜0.05),以上指标均呈MTH剂量依赖性趋势.结论 MTH提取物可抑制LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7的活化,也可抑制LPS诱导的大鼠肺部的炎症反应,可能与抑制NF-κB信号通路相关.
关键词：墓头回巨噬细胞脂多糖炎症反应核因子κB
分类号：R285(中药学)
资助基金：上海市闵行区自然科学研究课题(2023MHZ098)
论文发表日期：2024-12-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：9( 861-869 )
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