STUB1调控GPX4泛素化影响结肠癌细胞铁死亡及CD8+T细胞杀伤功能
孙龙
楼帆帆
王国波
朱志华
邵建力
317100 台州,三门县人民医院胃肠外科
摘要：目的 探讨含STIP1同源物U-框蛋白1(STUB1)蛋白对结肠癌细胞(HCT116)谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)泛素化和铁死亡及CD8+T细胞杀伤HCT116功能的影响.方法 HCT116细胞设对照组、空载质粒转染(pcDNA3.1-vector)组、STUB1过表达质粒转染(pcDNA3.1-STUB1)组和共转染pcDNA3.1-STUB 1+pcDNA3.1-GPX4组.CCK-8实验测定细胞增殖能力.克隆形成实验测定细胞克隆形成能力.丙二醛(MDA)试剂盒测定细胞中MDA水平.亚铁离子(Fe2+)探针检测细胞内Fe2+水平.采用JC-1染料检测线粒体膜电位的变化.Western blot测定STUB1、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)和GPX4蛋白表达水平.免疫共沉淀实验测定STUB1与GPX4的结合.使用泛素抗体检测STUB1对GPX4蛋白泛素化修饰的影响.将不同质粒转染的HCT116细胞与人外周血CD8+T细胞共培养,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒测定CD8+T细胞对HCT116细胞的杀伤能力.ELISA实验测定共培养体系培养液中穿孔素、颗粒酶和干扰素-γ水平.结果 与对照组相比,pcDNA3.1-STUB1组HCT116细胞增殖能力、线粒体膜电位、SLC7A11和GPX4蛋白表达水平降低,STUB1蛋白表达、MDA、Fe2+水平和GPX4泛素化水平升高.与pcDNA3.1-STUB1组相比,pcDNA3.1-STUB1+pcDNA3.1-GPX4组HCT116细胞增殖能力、线粒体膜电位、SLC7A11和GPX4表达水平升高,MDA和Fe2+水平降低.HCT116细胞与CD8+T细胞共培养后,与对照组相比,pcDNA3.1-STUB1组CD8+T细胞对HCT116细胞杀伤率,培养液中穿孔素、颗粒酶和干扰素-γ水平显著升高.与pcDNA3.1-STUB1组相比,pcDNA3.1-STUB1+pcDNA3.1-GPX4组CD8+T细胞对HCT116细胞杀伤率,培养液中穿孔素、颗粒酶和干扰素-γ水平降低.结论 过表达STUB1促进结肠癌细胞HCT116中GPX4泛素化,诱导细胞铁死亡,增加CD8+T细胞对HCT116的杀伤作用.
关键词：结肠癌STUB1GPX4泛素化铁死亡CD8+T细胞
分类号：R735.3+5(消化系肿瘤)
资助基金：浙江省医药卫生科技计划项目(2021KY409)
论文发表日期：2025-05-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 289-296 )
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