人B7.1(CD80)的真核表达及抗白血病作用
马肖容1
张王刚1
刘苏虎1
杨章民2
陈刚1
1.西安交通大学第二医院血液内科,西安,7100042.陕西师范大学生命科学院,西安,710062
摘要：目的:构建人B7.1(CD80)重组真核表达载体,并在HL60细胞上表达,探讨其在急性白血病免疫治疗及免疫保护中的重要作用.方法:①应用分子克隆方法,采用PCR法扩增人B7.1基因片段,Apa I、Sal I分别双酶切PCR产物和表达载体pHook,纯化后的酶切产物由T4 DNA连接酶连接,转化大肠杆菌DH5α,应用Apa I、Sal I双酶切和DNA序列分析技术进一步鉴定阳性克隆.②应用脂质体转化技术将B7.1转化HL60细胞,并以FACS检测其表达.③将B7.1+细胞免疫小鼠,通过成瘤时间及存活时间等指标观察其免疫治疗和免疫保护作用.结果:①PCR法扩增出一大小约620 bp的基因片段;共筛选出6个阳性克隆,均可Apa I、Sal I双酶切出大小约620 bp的基因片段,与人B7.1基因片段大小相符,提示重组载体构建成功.进一步DNA序列分析证明人B7.1基因序列和读码框架正确,与文献报道人B7.1cDNA序列一致,无基因突变.②应用FACS在转化HL60上检测到B7.1的高效表达.③B7.1+HL60细胞能明显抑制肿瘤生长,延长白血病鼠存活时间,且其免疫预防时成瘤时间较野生型HL60(B7.1)显著延迟,小鼠存活时间明显延长.结论:应用分子克隆方法可成功构建人B7.1(CD80)重组真核表达载体,并稳定、高效表达于B7.1之急性髓性白血病(AML)细胞系HL60胞膜上,这种共刺激分子瘤苗具有显著免疫治疗和免疫保护作用,为将其应用于临床治疗提供依据.
关键词：B7.1(CD80)基因表达免疫保护
分类号：R733(造血器及淋巴系肿瘤)
论文发表日期：2003-09-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 231-236 )
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