腐败梭菌α毒素蛋白单克隆抗体制备
林静1
苗润春1
韩四娥2
贾青燕3
伏刚4
冉智光4
杨晓雪5
李明勇6
柴同杰1
韦良孟1
1.山东农业大学动物科技学院,山东泰安 2710182.金宇保灵生物药品有限公司,内蒙古呼和浩特3.青海生物药品厂有限公司,青海 西宁4.重庆澳龙生物制品有限公司,重庆5.山东省动物疫病预防与控制中心/山东人畜共患病流调监测中心,山东 济南6.青岛康大佳牧畜禽良种繁育有限公司,山东 青岛
摘要：将腐败梭菌参考株增殖、鉴定,使用饱和硫酸铵沉淀法粗提腐败梭菌天然 α 毒素,并通过SDS-PAGE方法对其进行检测.将扩增的 α 毒素目的片段和经酶切的pET-21a(+)载体同源重组,将构建好的重组质粒转入到BL21(DE3)感受态细胞中,并筛选阳性克隆株.在优化的表达条件下,对α毒素重组蛋白进行了大规模的表达.免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用间接ELISA方法进行阳性杂交瘤细胞筛选.制备及纯化腹水,进行效价、浓度、纯度及特异性测定.结果表明,本研究成功表达了可溶性腐败梭菌 α 毒素蛋白,大小约为46 kDa,筛选出的单抗3 E8和单抗6B12对重组蛋白效价检测结果均为1:256000,对天然 α 毒素的效价检测结果均为1:128000;纯度均已达到85％ 以上;单克隆抗体的浓度分别为3E8:2.27 mg/ml,6B12:1.96 mg/ml;均能够与腐败梭菌重组 α 毒素、天然 α 毒素特异性结合,而与产气荚膜梭菌 α 毒素无交叉反应.结论:得到特异性强、稳定性高的单抗3E8和单抗6B12,有助于腐败梭菌病的早期诊断及研究.
关键词：腐败梭菌α毒素原核表达单克隆抗体
分类号：S852.69(动物医学（兽医学）)
资助基金：国家重点研发计划(2016YFD0500905)
论文发表日期：2022-11-28
在线出版日期：2026-05-22（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 5-9 )