星点设计-效应面法优化复合酶解酪蛋白制备抗凝血肽的工艺研究
吴雄1
夏建开1
苗艳丽1
陈绍红2
张兆霞1
郭婉婷1
李棂灵1
1.广东海洋大学化学与环境学院,广东 湛江,5240882.广东海洋大学食品科技学院现代生物化学实验中心,广东 湛江,524088
摘要：目的 本文利用星点设计-效应面法优化复合酶解酪蛋白制备抗凝血肽的工艺条件,并测定其体外抗凝血活性与溶栓效果.方法 首先运用星点设计-效应面法来确定菠萝蛋白酶、胰蛋白酶、胰糜蛋白酶和木瓜蛋白酶这4种酶各自酶解酪蛋白的最佳反应条件,然后在各酶的最佳反应条件下对酪蛋白进行复合酶解,制得酪蛋白复合酶解液,再运用凝血酶滴定改进法来测定其体外抗凝血活性,并用抗凝血活性最高的酪蛋白复合酶解液进行体外溶栓实验.结果 4种酶酶解酪蛋白的最佳反应条件分别如下:菠萝蛋白酶:pH为6.50、温度为60.00℃、酶用量为12000.00 U/(g底物)、时间为3.00 h、料水比为1:7(m/V);胰蛋白酶和胰糜蛋白酶均为:pH为8.00、温度为50.00℃、酶用量为6000.00 U/(g底物)、时间为3.00 h、料水比为1:7(m/V);木瓜蛋白酶:pH为6.50、温度为60.00℃、酶用量为4000.00 U/(g底物)、时间为3.00 h、料水比为1:7(m/V).结论 本实验条件下,加酶组合为"菠萝蛋白酶-胰蛋白酶-胰糜蛋白酶-木瓜蛋白酶"的复合酶解制备的酪蛋白酶解液具有最高的体外抗凝血活性,为100.0 ATU?mL-1;新西兰大白兔的血栓线用100.0 ATU?mL-1的酶解液浸泡24 h后全部溶解,且兔血与100.0 ATU?mL-1酪蛋白酶解液的比例(V/V)为1:1和4:6的样品组放置48 h仍不凝固.
关键词：星点设计-效应面法酪蛋白复合酶解抗凝血肽体外溶栓
分类号：TQ460.6(制药化学工业)
资助基金：广东省教育厅重点平台及科研项目(No.2015KTSCX057)广东海洋大学大学生创新创业训练计划(No.CXXL2017140)
论文发表日期：2019-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 336-342 )
英文信息