基于特征肽液质联用技术的人血白蛋白鉴定与定量分析
陈真
王夙博
石峰
王聪聪
梁超超
咸瑞卿
山东省食品药品检验研究院,国家药品监督管理局仿制药研究与评价重点实验室,国家药品监督管理局创新药物临床研究与评价重点实验室,山东 济南 250101
摘要：目的 筛选人血白蛋白种属特异性肽段,并基于该特征肽建立一种高效液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS)对人血白蛋白进行定性定量分析的方法.方法 样品经胰蛋白酶酶解后,采用纳升液相色谱-高分辨质谱联用仪(nano HPLC-orbitrap fusion)分析,通过Proteome Discoverer质谱数据库搜索,筛选人血白蛋白的专属特征肽段;并采用液相-三重四极杆质谱联用多反应监测(multiple reaction monitor,MRM)模式,建立并验证专属性鉴别方法和定量分析方法,该方法以Waters ACQUITY UPLC BEH C18(2.1 mm×50 mm,1.7 μm)为色谱柱,含0.1%甲酸水溶液为流动相A,含 0.1%甲酸乙腈溶液为流动相B,进行梯度洗脱;流速为 0.2 mL·min-1,定性与定量离子对为m/z 507.5→189.2 和m/z 507.5→132.1.结果 选择氨基酸序列为LVAASQAALGL的特征肽作为人血白蛋白的检测肽段,方法检测限为 3.75 ng·mL-1,定量限为2.5 ng·mL-1,该肽段在12.5～100 ng·mL-1浓度范围内,线性关系良好(r=0.9964);精密度、重复性、稳定性试验的RSD均<5%,回收率为 92.3%～99.7%,RSD为 2.9%(n=6).结论 所选人血白蛋白特征肽段专属性强,可以准确识别人血白蛋白的种属来源;所建立的分析方法准确、可靠,可用于人血白蛋白定性鉴别及定量分析.
关键词：人血白蛋白特征肽胰蛋白酶酶解高效液相色谱-质谱联用技术
分类号：R927.2(药典、药方集（处方集）、药物鉴定)
资助基金：山东省重点研发计划(No.2022TZXD004)济南市新高校20条资助项目(No.20233052)
论文发表日期：2024-08-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 759-763,805 )
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