微小毛霉凝乳酶基因的克隆及在毕赤酵母GS115中的表达
张桂芝
武彬
井庆川
刘辉
石天虹
刘雪兰
魏祥法
刘瑞亭
1.山东省农业科学院家禽研究所,山东,济南,2500232.山东省农业科学院家禽研究所,山东,济南,2500233.山东省农业科学院家禽研究所,山东,济南,2500234.山东省农业科学院家禽研究所,山东,济南,2500235.山东省农业科学院家禽研究所,山东,济南,2500236.山东省农业科学院家禽研究所,山东,济南,2500237.山东省农业科学院家禽研究所,山东,济南,2500238.山东省农业科学院家禽研究所,山东,济南,250023
摘要：以微小毛霉基因组为模板,PCR扩增得到凝乳酶结构基因,经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切后,连接穿梭载体pPIC9K,转化大肠杆菌感受态细胞DH5α,并测定其核苷酸序列.测序结果证实扩增得到的片段为凝乳酶基因,与GenBank报道的序列(No.X06219)存在6对碱基的区别.将重组质粒电转化毕赤酵母GS115,构建重组菌P. pastoris GS115/pPIC9K-mcp,通过筛选得到抗G418浓度达到3.0 mg/ml、具有多拷贝基因的整合重组菌pPIC9K-mcp-03.用甲醇诱导进行初步发酵试验,测得该重组菌凝乳酶活力为5 660 U/ml,比微小毛霉发酵液提高50多倍,且发酵液电泳结果表明毕赤酵母自身分泌的蛋白很少,只能看到约38.5 ku的凝乳酶蛋白条带.
关键词：凝乳酶毕赤酵母克隆表达
分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)
资助基金：山东省农业科学院创新基金项目(编号2006YCX025)
论文发表日期：2009-01-01
在线出版日期：2026-05-22（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 1-4,15 )
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