鸡白细胞介素18成熟蛋白的原核表达及抗体间接ELISA方法的建立
苏倩倩
李恩扩
张海滨
周霞
胡敬东
1.山东农业大学动物医学院/山东省动物生物技术与疫病防治重点实验室,山东泰安,2710182.山东农业大学动物医学院/山东省动物生物技术与疫病防治重点实验室,山东泰安,2710183.山东农业大学动物医学院/山东省动物生物技术与疫病防治重点实验室,山东泰安,2710184.山东农业大学动物医学院/山东省动物生物技术与疫病防治重点实验室,山东泰安,2710185.山东农业大学动物医学院/山东省动物生物技术与疫病防治重点实验室,山东泰安,271018
摘要：将鸡白细胞介素18的成熟蛋白(chicken intedeukin 18 mature protein,mChIL - 18)基因在原核系统表达,采用Ni - NTA亲和层析方法纯化得到该重组蛋白.纯化后重组蛋白包被反应板,通过方阵滴定确定最佳抗原包被浓度、血清稀释倍数、羊抗鼠酶标二抗稀释倍数,建立检测ChIL - 18成熟蛋白抗体的间接ELISA方法.经方阵滴定结果确定最佳抗原包被质量浓度为4μg/ml,阳性血清稀释比例为1∶104,羊抗鼠IgG辣根过氧化物酶结合物最佳稀释比例为1∶12000,抗原抗体最佳结合时间是1.5h,血清与二抗最适反应时间为1h.阴性、阳性血清的判定标准为:被检样本的OD值是一组阴性样本OD值的2或3倍且OD450≥0.5,即为阳性,比值以P/N表示,1.5＜ P/N ＜2.0为可疑,P/N＜1.5为阴性.本试验结果证明该方法具有良好的稳定性、重复性和特异性,为下一步单抗的筛选鉴定奠定了必要的基础.
关键词：鸡白细胞介素18成熟蛋白(mChIL-18)原核表达蛋白纯化间接ELISA
分类号：Q503(一般性问题)
资助基金：山东省优秀中青年科学家科研奖励基金(2006BS06015)山东省自然科学基金(Y2008D12)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2026-05-22（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 5-9 )
英文信息