中国小麦花叶病毒 CP 和 CRP 蛋白的原核表达、抗血清制备及 RNA2侵染性克隆构建
孔凡惠1
脱建波1
魏娇1
唐伟1
李向东1
迟胜起2
田延平1
于金凤1
1.山东农业大学植物保护学院植物病理学系,山东 泰安,2710182.青岛农业大学农学与植物保护学院,山东 青岛,266109
摘要：中国小麦花叶病毒（Chinese wheat mosaic virus，CWMV）引起的小麦土传花叶病在山东烟台、威海等地危害严重。本研究克隆了 CWMV 烟台分离物的衣壳蛋白（Coat protein，CP）及富含半胱氨酸蛋白（Cyste-ine －rich protein，CRP）基因，并将其连接到原核表达载体 pEHISTEV，转化大肠杆菌 Rosetta。经 IPTG 诱导，表达出分子量均为19 kD 的 CP 和 CRP。将二者从凝胶中切下，乳化后免疫新西兰大耳兔4次，获得了两种蛋白的多克隆抗体。ELISA 检测表明，CWMV CP 和 CRP 抗血清的效价分别为1∶4096和1∶2048。Western blot 分析证明该抗血清只与感染 CWMV 的小麦有特异性反应，而与健康或感染小麦黄花叶病毒的小麦无反应。利用含 T3启动子的引物通过 RT －PCR 扩增出 CWMV RNA2全长片段，经 T／A 克隆连接到 pMD18－T，获得质粒 pMD18－T －CWMV －RNA2。该质粒经 Xba Ⅰ线性化后，利用 T3 RNA 聚合酶进行体外转录，转录产物摩擦接种本氏烟，15℃培养3天后，利用 Western blot 可从接种叶片中检测到瞬时表达的 CWMV CP 蛋白。
关键词：中国小麦花叶病毒衣壳蛋白(CP)富含半胱氨酸蛋白(CRP)抗血清制备侵染性克隆
分类号：S188+S435.121.4(农业生物学)
资助基金：公益性行业(农业)科研专项(201303021)山东省现代农业产业技术体系(SDAIT－01－022－09)
论文发表日期：2015-08-01
在线出版日期：2026-05-22（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 6-10 )
英文信息