嗜热革节孢第十二家族内切葡聚糖酶的定点突变
刘娇娇
刘玉姣
王欢
刘宁
李多川
1.山东农业大学植物保护学院,山东泰安,2710182.山东农业大学植物保护学院,山东泰安,2710183.山东农业大学植物保护学院,山东泰安,2710184.山东农业大学植物保护学院,山东泰安,2710185.山东农业大学植物保护学院,山东泰安,271018
摘要：纤维素酶有广泛的应用前景,探究纤维素酶的性质及其催化作用机制有重要意义.本研究对嗜热革节孢第十二家族内切葡聚糖酶steg1基因进行定点突变,研究突变对酶活性的影响.选择位于酶催化活性通道上的6个氨基酸位点(N35、W37、Y77、W128、Y145、N168)进行突变,得到8个突变酶(N35Q、W37H、Y77F、W128S、Y145F、Y145A、Y145W、N168Q).结果显示,与野生酶WT相比,所有突变酶的活性降低,其中突变酶Y77F、W128S、Y145A的Km值和kcat值都降低;N35Q的Km和kcat值都升高;W37H、Y145F、Y145W、N168Q的Km值升高,kcat值降低.WT与突变酶的最适pH值为5.0,均保持不变.突变酶Y77F、N35Q的最适温度降低到50℃,WT和其余突变酶的最适温度为55℃.突变酶Y77F和N35Q在60℃处理10 min后分别保持49.34％和22.90％的活性,WT和其余突变酶在60℃处理10 min后都失活.本研究为探究内切葡聚糖酶的催化作用机理以及分子改造奠定基础.
关键词：内切葡聚糖酶定点突变酶活性酶学性质
分类号：S188+.3(农业生物学)
资助基金：国家科技支撑计划(2015BAD15B05)国家高技术研究发展计划（863计划）(2012AA10180402)国家自然科学基金(31571949)
论文发表日期：2018-07-02
在线出版日期：2026-05-22（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 55-60,66 )
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