甘蔗花叶病毒辅助成分-蛋白酶基因原核表达及抗血清制备
许小洁1
于伟鹏1
杨广玲2
韩士玲2
何梦君2
杨旭2
李向东1
1.山东农业大学植物保护学院植物病毒学研究室,山东 泰安 271018;山东省农业微生物重点实验室,山东 泰安 2710182.山东农业大学植物保护学院植物病毒学研究室,山东 泰安,271018
摘要：利用RT-PCR克隆甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)DWK1分离物辅助成分-蛋白酶(helper component-proteinase,HC-Pro)基因,酶切后连接原核表达载体pEHISTEV,得到重组质粒pE-HISTEV-SCMV-HC-Pro.将重组质粒转化大肠杆菌菌株Rosetta,经IPTG诱导后,表达出57 kD的融合蛋白.切胶回收融合蛋白,多点注射法免疫新西兰长耳兔,制备SCMV HC-Pro抗血清.间接ELISA结果表明,该血清效价为1:8192.感染DWK1的玉米叶片病汁液稀释128倍时,该血清仍然能够有效检测出HC-Pro.Western-blot检测结果表明,该血清可特异性检测SCMV第Ⅰ组分离物DWK1和第Ⅳ组分离物DWK2,与同属的烟草脉带花叶病毒(TVBMV)和马铃薯Y病毒(PVY)均无反应.本研究为准确、快速检测SCMV HC-Pro并进一步研究其功能和作用机制奠定了基础.
关键词：甘蔗花叶病毒辅助成分-蛋白酶原核表达抗血清检测
分类号：S435.131.4(病虫害及其防治)
资助基金：国家重点研发计划(2018YFD0200604)山东省现代农业产业技术体系(SDAIT-02-10)
论文发表日期：2019-01-01
在线出版日期：2026-05-22（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 87-91 )
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