禽腺病毒4型Fiber-2蛋白原核表达及间接ELISA的构建
潘静1
孟凯2
秦晓冰3
1.青岛农业大学动物医学院/山东省预防兽医学重点实验室,山东 青岛 266109;山东省农业科学院家禽研究所,山东 济南 2501002.山东省农业科学院家禽研究所,山东 济南 2501003.青岛农业大学动物医学院/山东省预防兽医学重点实验室,山东 青岛 266109
摘要：禽腺病毒(FAdV)是世界范围内流行的禽类常见传染病病原,2015年暴发的由新型血清4型禽腺病毒(FAdV-4)引起的急性传染病,给养殖户造成巨大的经济损失.为做到早期诊断和检测,并防控、净化该病毒病,本试验利用Fiber-2蛋白建立了检测FAdV-4的ELISA方法.根据禽腺病毒4型SDJN0105株Fiber-2基因的核苷酸序列,经序列优化后合成1440 bp基因序列,连入pET-30a(+)载体构建pET-30a(+)-Fiber-2重组质粒,在BL21(DE3)感受态细胞中诱导表达Fiber-2蛋白,利用亲和层析柱纯化重组Fiber-2蛋白,经SDS-PAGE和Western-Blot鉴定后,以Fiber-2蛋白作为包被抗原,通过反应条件优化建立检测禽腺病毒4型抗体的间接ELISA方法.结果表明,获得了以上清形式表达的重组Fiber-2蛋白,Western-Blot鉴定表明重组Fi-ber-2蛋白具有良好的免疫学活性;重组Fiber-2蛋白的最佳包被浓度为4.0μg/mL,待检血清最佳稀释度为1:400;该方法特异性好,仅与禽腺病毒4型阳性抗体发生反应,敏感度可达1:6400;批内和批间重复性变异系数均小于5％;构建的间接ELISA试剂盒在4℃环境下放置12个月仍然有效.本研究建立的禽腺病毒4型抗体间接ELISA检测方法特异性强、敏感性高、重复性好、保质期长,可用于禽腺病毒4型的监测和流行病学调查.
关键词：禽腺病毒4型Fiber-2蛋白原核表达间接ELISA
分类号：S852.65+7(动物医学（兽医学）)
资助基金：山东省自然科学基金(ZR2021MC060)
论文发表日期：2021-11-28
在线出版日期：2026-05-22（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 100-105 )
英文信息