猪TRIM56全长及其截短体真核表达质粒的构建及蛋白的表达和定位
姚来娣1
吴香菊2
齐静2
丛晓燕2
李均同2
贾杏林3
杜以军2
1.湖南农业大学动物医学院,湖南长沙 410128;山东省农业科学院畜牧兽医研究所/山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室/农业农村部畜禽生物组学重点实验室,山东济南 2501002.山东省农业科学院畜牧兽医研究所/山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室/农业农村部畜禽生物组学重点实验室,山东济南 2501003.湖南农业大学动物医学院,湖南长沙 410128
摘要：本研究构建了猪TRIM56(sTRIM56)全长及其截短体的真核表达质粒,并检测了其融合蛋白的表达和定位.首先,根据sTRIM56基因序列及结构特点,设计扩增全长及4个截短体的引物,提取猪肺泡巨噬细胞3D4/21的总RNA,RT-PCR扩增sTRIM56全长及截短体基因,并将其克隆至pXJ41真核表达载体,构建全长及其截短体的真核表达质粒.其次,将sTRIM56全长及截短体真核表达质粒转染HEK-293T细胞,Western blotting检测其蛋白表达;转染猪肺泡巨噬细胞3D4/21,间接免疫荧光试验(IFA)检测其亚细胞定位.双酶切和测序结果显示,sTRIM56全长及截短体的真核表达质粒构建成功;sTRIM56蛋白约为82 kDa,与预期相符,各截短体蛋白条带也与预期相符;sTRIM56全长及4个截短体蛋白均主要定位于细胞质中.本研究结果可为后续深入研究sTRIM56蛋白及其不同结构域的抗病毒作用及分子机制奠定基础.
关键词：猪TRIM56截短体真核表达质粒表达定位
分类号：S828:Q78(家畜)
资助基金：山东省自然科学基金(ZR2021ZD08)山东省自然科学基金(ZR2020QC196)山东省自然科学基金(ZR2020KC005)山东省自然科学基金(ZR2021MC139)国家自然科学基金(32102710)国家重点研发计划(2021YFD1800300)山东省农业科学院农业科技创新工程项目(CXGC2023A21)山东省农业科学院农业科技创新工程项目(CXGC2023G03)
论文发表日期：2023-09-28
在线出版日期：2026-05-22（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 10-16 )
英文信息