小麦miRNA靶基因的体外实验验证
房春豪1
陈志浩2
王开2
汪晓璐2
徐文竞2
祁广2
马朋涛1
韩冉2
刘成2
1.烟台大学生命科学学院,山东 烟台 2640002.山东省农业科学院作物研究所/农业部黄淮北部小麦生物学与遗传育种重点实验室/小麦玉米国家工程实验室,山东 济南 250100
摘要：miRNA是一类内源非编码单链小RNA,广泛存在于动植物中,主要通过切割靶基因或者抑制靶基因表达参与细胞分化、生长和发育等多种生物学调控.目前缺少一种快速简便验证miRNA靶基因的方法.本研究基于前期筛选到的小麦特有的miRNA——Tae-miR9666a,合成其前体及前体突变体,并连接到表达载体上,构建含有GFP(绿色荧光蛋白)标记的靶基因过表达载体,共转化烟草,通过观察GFP的荧光亮度判断靶基因的切割情况,以此来验证miRNA与靶基因的相互作用.结果发现,共转miRNA前体的烟草叶片的荧光亮度较低,表明靶基因被miRNA切割,其后的GFP无法正常表达;共转miRNA前体突变体的烟草叶片的荧光亮度与单转靶基因的相当,表明miRNA前体突变体未切割靶基因,导致GFP 正常表达.本实验有效证明了miRNA的靶基因切割情况,也表明利用烟草验证miRNA与靶基因相互作用是可行的.
关键词：小麦miRNA靶基因Tae-miR9666aGFP本氏烟草
分类号：S512.1:Q781(禾谷类作物)
资助基金：山东省自然科学基金(ZR2020MC098)国家自然科学基金(32001544)国家工程实验室开放课题(2018LYZWS05)山东省重点研发计划(重大科技创新工程)项目(2021LZGC009)
论文发表日期：2024-02-28
在线出版日期：2026-05-22（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 1-7 )
英文信息