FMDV3D基因真核表达质粒的构建、表达及对Ⅰ型IFN信号通路的作用
苗勤1
吴香菊2
齐静2
丛晓燕2
李均同2
王林3
杜以军2
1.山东农业大学动物科技学院,山东 泰安 271018;山东省农业科学院畜牧兽医研究所/山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室,山东 济南 250100;农业农村部畜禽生物组学重点实验室,山东 济南 2501002.山东省农业科学院畜牧兽医研究所/山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室,山东 济南 250100;农业农村部畜禽生物组学重点实验室,山东 济南 2501003.山东农业大学动物科技学院,山东 泰安 271018
摘要：本研究旨在构建口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)3D基因真核表达质粒,并探究其对Ⅰ型干扰素(interferon,IFN)信号通路的作用.根据GenBank序列合成 3D基因并将其插入真核表达载体pXJ41 构建真核表达质粒pXJ41-Myc-3D,经PCR、双酶切及测序鉴定正确后分别转染HEK-293T细胞和PK-15 细胞,Western blotting及间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)检测 3D蛋白在细胞内的表达及定位.通过双荧光素酶报告基因(Luciferase)、Real-time PCR、TCID50 等试验检测HEK-293T细胞中过表达 3D蛋白对水疱性口炎病毒(Versicular stomatitis virus,VSV)诱导的Ⅰ型IFN信号通路的影响.结果显示,真核表达质粒pXJ41-Myc-3D构建成功;3D蛋白在HEK-293T细胞中表达,大小约为55 kDa,主要定位在细胞核中;3D蛋白抑制了VSV诱导的IFN-β启动子活性和IFN-β mRNA水平,促进了VSV的复制.本研究为深入探究 3D蛋白抑制Ⅰ型IFN信号通路的作用机制奠定了基础.
关键词：口蹄疫病毒3D蛋白真核表达Ⅰ型IFN信号通路
分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)
资助基金：国家自然科学基金(32373094)国家自然科学基金(32102710)山东省自然科学基金(ZR2021ZD08)山东省自然科学基金(ZR2023MC076)山东省自然科学基金(ZR2021MC139)国家兽用生物制品工程技术研究中心开放课题(GTKF(23)009)国家重点研发计划(2021YFD1800300)
论文发表日期：2024-02-28
在线出版日期：2026-05-22（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 144-150 )
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