云南金花茶苯丙氨酸解氨酶基因CfPAL的克隆及体外酶活鉴定
王何泽
母德锦
陈思慧
田自能
唐军荣
西南林业大学林学院/西南地区生物多样性保育国家林业和草原局重点实验室,云南 昆明 650224
摘要：为给云南金花茶(Camellia fascicularis)调控黄酮类化合物分子育种提供基因来源及依据,本研究对从前期转录组测序数据获得的苯丙氨酸解氨酶基因进行克隆和生物信息学分析,并利用体外酶活测定进行功能鉴定.结果从云南金花茶中克隆获得CfPAL基因,GenBank登录号为PP502845.生物信息学分析结果表明,CfPAL的cDNA全长为 2 145 bp,编码 714 个氨基酸,蛋白分子量为 77.76 kDa;CfPAL基因的表达偏好A和T,最优密码子为AGG;无信号肽和跨膜结构域,是一个位于细胞质和内质网的亲水稳定型的酸性蛋白;其二级结构主要由α-螺旋和无规则卷曲为主,三级结构呈现典型的"海马状"结构;CfPAL从属于裂解酶I-Like超家族,具有PAL家族保守序列(GTITASGDLVPLSYIAG),与 9 条同源PAL蛋白序列相似性为90.21%;与茶(C.sinensis)和狭叶油茶(C.lanceoleosa)的亲缘进化关系最近,相似度分别为 99.02%、98.19%;CfPAL蛋白与黄酮类化合物特异性合成途径的关键酶CHS存在关联性.体外酶促反应结果表明,CfPAL蛋白能催化苯丙氨酸生成反式肉桂酸,但不能将酪氨酸催化生成对香豆酸.CfPAL属于典型的苯丙氨酸解氨酶基因家族,在调控黄酮类化合物合成途径中起重要作用.
关键词：云南金花茶苯丙氨酸解氨酶基因克隆序列分析功能验证
分类号：S685.14(观赏园艺（花卉和观赏树林）)Q781(基因工程（遗传工程）)
资助基金：云南省兴滇英才支持计划青年人才项目(XDYC-QNRC-2022-0203)
论文发表日期：2025-05-30
在线出版日期：2026-05-22（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：10( 54-63 )
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