Midkine启动子调控的HSV-TK基因重组腺病毒的构建
陆春明
王荣
顾红光
陆建华
杨俊涛
1.重庆第三军医大学第三附院大坪医院,重庆,4000422.重庆第三军医大学第三附院大坪医院,重庆,4000423.重庆第三军医大学第三附院大坪医院,重庆,4000424.重庆第三军医大学第三附院大坪医院,重庆,4000425.重庆第三军医大学第三附院大坪医院,重庆,400042
摘要：目的构建以人midkine(MK)启动子调控的TK基因的重组复制缺陷型腺病毒.方法以AdenoXTM表达试剂盒为基础,应用分子克隆技术,将穿梭质粒pShuttle的CMV启动子替换为MK启动子,并将由pHSV-106获取HSV-TK基因的编码序列亚克隆至其下游,酶切鉴定阳性重组穿梭质粒pShuttle-MK-TK.通过I-CeuI和PI-SceI两个稀有酶切位点,将目的基因与腺病毒质粒DNA(pAdeno-X)进行体外连接,获得含目的基因的重组腺病毒质粒DNA,后者经限制性内切酶Pac Ⅰ切割后,两端露出反向末端重复序列(ITR),利用脂质体转染293细胞,获得含有目的基因重组腺病毒上清,PCR检测.结果酶切结果显示,MK启动子与TK基因均正向插入pShuttle中,TK位于MK启动子的下游.PCR检测显示重组腺病毒中含有MK启动子及TK基因片段.结论体外连接法可成功构建以人MK启动子调控的TK基因的重组腺病毒.
关键词：胸苷激酶基因基因载体重组腺病毒
分类号：R394.8(医学遗传学)
资助基金：重庆市科委项目(6828)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 4-6 )
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