GFP基因真核表达质粒的构建及其在人胚肾293细胞中的表达
李德良
马文丽
师永霞
李凌
郑文岭
1.南方医科大学基因工程研究所,广东广州,5105152.南方医科大学基因工程研究所,广东广州,5105153.南方医科大学基因工程研究所,广东广州,5105154.南方医科大学基因工程研究所,广东广州,5105155.南方医科大学基因工程研究所,广东广州,510515
摘要：目的克隆绿色荧光蛋白(GFP)基因并构建真核表达载体,观察其在人胚肾293(下称293细胞)细胞中的表达和分布,为制备自行设计的以λ噬菌体为载体的人类免疫缺陷病毒(HIV)核酸疫苗的阳性对照奠定基础.方法以克隆好的pUC18/GFP为模板,根据Genbank中GFP的核苷酸序列设计引物,并在引物的5′端分别引入BamHⅠ及XhoⅠ酶切位点,特异性扩增GFP基因.TA克隆后经双酶切、测序等鉴定重组质粒,再经双酶切、连接构建含GFP编码基因的真核表达载体,酶切鉴定分析后,将该重组质粒通过脂质体介导,转染293细胞.荧光显微镜观察GFP在细胞内的表达和分布.结果重组质粒经BamHⅠ、 XhoⅠ双酶切成5.4kb与0.7kb的片断,表明表达载体pcDNA3.1(+)中插入了GFP基因片断,测序结果表明编码框正确,并在293细胞中获得了表达,分布均匀.结论 pcDNA3.1(+)/GFP真核表达载体已成功构建,并可在293细胞中表达.
关键词：绿色荧光蛋白pcDNA3.1(+)293细胞
分类号：R446(诊断学)
资助基金：中国科学院项目（非规范项目）(39880032)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 8-10 )
英文信息