重组VEGF165基因表达与活性检测
白育庭
闵清
查文良
高卉
万敬枝
1.咸宁学院医学院,湖北咸宁,4371002.咸宁学院医学院,湖北咸宁,4371003.咸宁学院医学院,湖北咸宁,4371004.咸宁学院医学院,湖北咸宁,4371005.咸宁学院医学院,湖北咸宁,437100
摘要：目的 为血管内皮生长因子(VEGF165)生物学分子机制的研究奠定基础.方法 用RT-PCR法从人胎肝总RNA中逆转录扩增VEGF165,将其插入表达载体pET-32a(+) Vector中, 将测序鉴定正确的重组表达载体转化至E. Coli XL-Blue中表达,并用纯化蛋白刺激人脐静脉内皮细胞,检测其促增殖活性.结果 经异丙基硫代-βD-半乳糖苷(IPTG)诱导后,VEGF165(His)6得到有效表达, Western blot分析可以观察到相对分子质量为26 kD的诱导表达条带,该表达蛋白可与VEGF多克隆抗体发生特异性反应.用His-bind亲和层析纯化得到纯度较高的目的 蛋白,该蛋白可促进内皮细胞增殖.结论 基因工程技术可使大肠杆菌有效表达人VEGF165,并得到纯度较高、有增殖活性的VEGF165蛋白;此为进一步研究VEGF的生物学分子机制奠定了基础.
关键词：VEGF165基因克隆表达纯化增殖
分类号：R394.8(医学遗传学)
资助基金：湖北省教育厅科研项目(2004D006)湖北省卫生厅科研项目(JX3B81)咸宁学院科研基金重点项目(KY0322)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 24-26 )
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