AFP基因特异性miRNA表达质粒的构建及鉴定
张玉玲1
栾英姿2
苏占涛1
郑燕2
郏雁飞2
汪运山2
1.山东省医学科学院基础医学研究所,山东济南250062;济南市中心医院2.济南市中心医院
摘要：目的 构建针对人甲胎蛋白(AFP)基因的miRNA表达质粒,为进一步研究AFP基因功能奠定基础.方法 沿mRNA序列寻找连续两个AA及后面的19个核苷酸,通过同源性比较,选择与其他任何基因无同源性的序列即作为潜在的miRNA靶位点,针对AFP基因的编码序列体外合成两段互补的寡核苷酸,与线性化的pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR RNAi EXPRESSION VECTOR载体连接后转化大肠杆菌,扩增、纯化获得所需质粒,以琼脂糖凝胶电泳、PCR及基因测序鉴定其相对分子质量及插入片段的序列.结果 纯化质粒的相对分子质量为5.8 kb,PCR鉴定结果符合目的 条带(260 bp左右)大小,插人的寡核苷酸序列与设计的序列完全相符.结论 成功构建了针对人AFP基因的miRRA表达质粒.
关键词：质粒甲胎蛋白基因表达
分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)R318(医用一般科学)
资助基金：山东省自然科学基金(Z2003C01)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 33-35 )
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