Tumstatin-EGFP真核表达载体构建及稳定转染CHO细胞系的建立
姚丽娟
罗以勤
孔建新
赵亮
常珍
濮跃晨
马筱玲
1.安徽医科大学附属省立医院,安徽合肥,2300012.安徽医科大学附属省立医院,安徽合肥,2300013.安徽医科大学附属省立医院,安徽合肥,2300014.安徽医科大学附属省立医院,安徽合肥,2300015.安徽医科大学附属省立医院,安徽合肥,2300016.安徽医科大学附属省立医院,安徽合肥,2300017.安徽医科大学附属省立医院,安徽合肥,230001
摘要：目的 构建重组tumstatin-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的分泌型真核表达载体质粒,建立稳定转染的中国仓鼠卵巢细胞系(CHO-K1).方法 利用重叠多聚酶链反应(PCR)技术从pGEM-T/STL质粒和pEGFP-C2质粒中扩增出STL-EGFP,用DNA重组技术将片段定向插入pIRESneo3质粒中,经酶切和序列验证正确后,用lipofectamine 2000转染CHO-K1细胞,通过G418筛选建立稳定转染的CHO细胞系,用逆转录-PCR、Western blot检测tumstatin-EGFP的表达,用倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达.结果 重组真核表达载体正确构建并在CHO细胞获得稳定表达,tumstatin-EGFP基因整合入细胞基因组DNA,培养液上清有融合蛋白tumstatin-EGFP的分泌,绿色荧光蛋白的表达高达95%以上.结论 成功构建了质粒PIRESneo3-STL-EGFP,获得稳定表达tumstatin-EGFP的细胞系.
关键词：肿瘤抑素增强型绿色荧光蛋白融合蛋白表达载体
分类号：R786(口腔科学)
资助基金：国家自然科学基金(30672437)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 27-30 )
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