大规模噬菌体DNA测序样品制备方法的改进与应用
刘承武
姚琦
袁利华
牛茂昌
刘靖华
杨敏
冯国开
姜勇
1.南方医科大学,广东广州,5105152.南方医科大学,广东广州,5105153.南方医科大学,广东广州,5105154.南方医科大学,广东广州,5105155.南方医科大学,广东广州,5105156.南方医科大学,广东广州,5105157.南方医科大学,广东广州,5105158.南方医科大学,广东广州,510515
摘要：目的 优化大规模噬菌体DNA测序样品制备的方法,提高筛选效率.方法 通过PCR扩增噬菌体环七肽库第一轮、第二轮和第三轮淘选产物中含插入目的片段噬菌体DNA,经琼脂糖凝胶电泳和DNA测序鉴定,并与经典的噬菌体DNA提取方法进行比较.结果 PCR扩增法和经典法制备的噬菌体DNA的测序成功率分别为92.73%、93.75%,差异无统计学意义(P>0.05);两种方法制备的同一个噬菌体克隆的DNA经测序鉴定显示测序结果一致;第一轮、第二轮和第三轮淘选产物的噬菌体克隆经PCR扩增和电泳鉴定,发现无插入目的片段的噬菌体克隆检出率逐轮增加分别为1.04%、4.17%和22.69%(P<0.01).结论 PCR扩增含插入目的片段噬菌体DNA的方法可使大规模噬菌体筛选和DNA测序更加方便、快捷、实用,值得推广.
关键词：噬菌体展示技术DNA噬菌体聚合酶链反应淘选
分类号：R363.21(病理学)
资助基金：国家自然科学基金(U0632004)国家自然科学基金(30572151)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 16-18 )
英文信息