人NKp30基因克隆及其真核表达载体的构建
金炎
赵雪
刘晓雯
徐洁
王勇
赵跃然
1.山东大学附属省立医院,山东济南,2500212.山东大学附属省立医院,山东济南,2500213.山东大学附属省立医院,山东济南,2500214.山东大学附属省立医院,山东济南,2500215.山东大学附属省立医院,山东济南,2500216.山东大学附属省立医院,山东济南,250021
摘要：目的 对人NKp30 (hNKp30)进行基因克隆并在大肠埃希菌中重组表达,为进一步研究NK细胞抗肿瘤作用奠定基础.方法 提取人外周静脉血单个核细胞,分离纯化外周血总RNA.用PCR 扩增hNKp30片段,克隆至质粒载体pMD18-T,对克隆的DNA片段行序列分析.用限制酶XhoI、EcoRI消化pMD18-T-hNKp30 重组质粒,分离hNKp30片段,插入真核表达载体pIRES2-EGFP 相应限制酶位点,酶谱分析鉴定重组表达载体pIRES2-EGFP-hNKp30,并转染COS-7细胞.结果 PCR扩增DNA片段与hNKp30 cDNA大小一致.重组质粒pMD18-T-hN Kp30 的DNA序列分析显示,克隆DNA 序列与文献报道hNKp30 的cDNA 序列一致.重组表达质粒pIRES2-EGFP-hNKp30转染COS-7细胞后,实现了hNKp30基因在COS-7细胞中的体外转染及瞬时表达.结论 采用重组技术成功构建了hNKp30真核表达载体,为探讨NK细胞受体的特性及其信号转导机制奠定了基础.
关键词：杀伤细胞真核表达转染基因重组
分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)
资助基金：山东省卫生厅计划课题资助项目(2007HW092)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 18-20 )
英文信息