Heymann肾炎RAP全长及氨基端融合蛋白表达载体的构建及表达
达展云
范亚平
董海霞
施岚
施辉
陈晓岚
1.南通大学附属医院,江苏南通,2260012.南通大学附属医院,江苏南通,2260013.南通大学附属医院,江苏南通,2260014.南通大学附属医院,江苏南通,2260015.南通大学附属医院,江苏南通,2260016.南通大学附属医院,江苏南通,226001
摘要：目的 构建大鼠Heymann肾炎致病源RAP全长和氨基端多肽原核融合表达载体,表达并纯化融合蛋白.方法 采用RT-PCR法获得RAP全长的cDNA,将其与pGEM-T克隆载体连接并转化,筛选阳性克隆测序;设计针对RAP全长和氨基端的引物进行PCR扩增,获得相应的DNA.纯化后与PGEX-4T-1载体连接,亚克隆到感受态细菌BL21中,经IPTG诱导,表达融合蛋白并纯化,经SDS-PAGE和Western Blot检验.结果 酶切分析、PCR及DNA序列测定结果表明成功构建了重组原核表达载体pGEX-4T-1-RAP1083/258,并表达出RAP全长70kD和氨基端36kD的融合蛋白.Western Blot结果显示分别在70、36 kD处出现特异性条带,与理论相符.结论 RAP1083/258与pGEX-4T-1融合基因表达载体的成功构建及其融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达,为后续研究RAP不同区段在Heymann肾炎发病机制中的作用奠定了基础.
关键词：Heymann肾炎受体相关蛋白原核表达载体融合蛋白
分类号：R392.1(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(30670986)江苏省自然科学基金(BK2006059)
论文发表日期：2009-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 32-35 )
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