胶原酶脐带灌注消化法在人脐带静脉内皮细胞的原代分离培养中的作用
谢明斌
刘梅林
1.北京大学第一医院,北京,1000342.北京大学第一医院,北京,100034
摘要：目的 探讨人脐带静脉内皮细胞原代分离培养方法,为血管内皮功能及其相关疾病的研究奠定基础.方法 采用0.1%Ⅰ型胶原酶脐带静脉灌注消化法,分离得到血管内皮细胞后,加入M199混合培养液,置于37 ℃、5%CO2培养箱中培养,以0.25%胰蛋白酶进行消化传代培养.细胞鉴定采用形态学方法、透射电镜法以及细胞Ⅷ因子免疫化学法.结果 原代人脐静脉内皮细胞约24 h后完全贴壁,第3～4天融合成单层,呈铺路石状镶嵌排列;细胞透射电镜观察可见特征性Weibel-Palade小体以及细胞表面大量微绒毛;细胞Ⅷ因子抗原免疫组化以及荧光显示均呈阳性反应,证实所分离培养细胞为人脐带静脉内皮细胞.结论 采用胶原酶脐带静脉灌注消化法可分离得到较为纯化的内皮细胞,并可在体外连续大量增殖传代,5代内的细胞均可用于研究.
关键词：人脐带静脉内皮细胞原代培养Weibel-Palade小体Ⅷ因子抗原
分类号：R714.56(产科学)
资助基金：留学回国人员科技活动择优资助项目(200133)
论文发表日期：2009-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 10-12 )
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