带有HA标签的HBc蛋白真核表达质粒的构建及其在HEK293细胞中的表达
章广玲1
袁丽杰1
王芳2
汤华2
张银2
张淑杰1
1.华北煤炭医学院生物科学系,河北唐山,0630002.天津医科大学天津市生命科学中心实验室
摘要：目的 构建带有流感病毒血凝素9钛表位标签(HA标签)的乙型肝炎病毒(HBV)核心蛋白(HBc)的表达质粒,为进一步研究HBc蛋白基因的功能奠定实验基础.方法 设计并合成扩增HBc蛋白全长的PCR引物,以野生型的HBV质粒pDolTHBV-1为模板,PCR扩增全长的HBc蛋白,大小为563 bp;PCR产物经过EcoRI和XholI酶切后,与线性化的pcDNA3/HA载体连接后转化大肠杆菌,扩增、纯化获得所需质粒,以琼脂糖凝胶电泳、酶切鉴定以及基因测序鉴定其分子质量和插入片段的序列;构建的质粒转染HEK293细胞48 h后,RIPA裂解细胞,Western blot检测HBc蛋白表达.结果 纯化质粒的相对分子质量为5.9 kb,酶切鉴定结果符合目的条带(563 bp)大小,插入的寡核苷酸序列与野生型HBV基因序列完全相符,表达的融合蛋白大小为28 kDa.结论 成功构建了带有HA标签的HBc蛋白的真核表达质粒pcDNA3/HA-HBc蛋白, 为进一步研究HBc蛋白的功能奠定了良好的实验基础.
关键词：质粒乙肝病毒核心蛋白基因表达
分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)
资助基金：前沿技术计划项目(09JCZJC17500)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：2( 38-39 )