拮抗型抗hTNF-α单克隆抗体的筛选和活性鉴定
黄蕊
马莉
谷岳
谢印良
佘鸣
邵晓枫
熊冬生
刘汉芝
许元富
1.中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所,实验血液学国家重点实验室,天津,3000202.中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所,实验血液学国家重点实验室,天津,3000203.中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所,实验血液学国家重点实验室,天津,3000204.中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所,实验血液学国家重点实验室,天津,3000205.中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所,实验血液学国家重点实验室,天津,3000206.中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所,实验血液学国家重点实验室,天津,3000207.中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所,实验血液学国家重点实验室,天津,3000208.中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所,实验血液学国家重点实验室,天津,3000209.中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所,实验血液学国家重点实验室,天津,300020
摘要：目的 制备和筛选拮抗型人肿瘤坏死因子-α(hTNF-α)单克隆抗体(McAb)并检测其活性,为临床靶向治疗提供理论依据.方法 用经典免疫方法获得抗hTNF-α McAb,经接种于小鼠腹腔后获得腹水,采用硫酸铵沉淀和蛋白G亲和层析法纯化得到纯度>95%的抗hTNF-α McAb,采用ELISA方法测定效价、抗体亚型和亲和力,MTT法测定抗体阻断hTNF-α对L929细胞的细胞毒作用和筛选拮抗型抗hTNF-α McAb,流式细胞仪法测定抗体阻断hTNF-α诱导L929细胞凋亡的作用.结果 获得1株能稳定分泌抗hTNF-α McAb的杂交瘤细胞株XB10,分泌的抗体亚型为IgG2b;该抗体能高亲和性与hTNF-α结合,特异性阻断hTNF-α对L929细胞的细胞毒作用和抑制细胞凋亡,并呈一定剂量依赖性.结论 成功制备能稳定分泌拮抗型抗hTNF-α的McAb的杂交瘤细胞株,其分泌的抗体对hTNF-α有特异性拮抗作用,为今后研制临床治疗型抗hTNF-α的基因工程抗体奠定了实验基础.
关键词：人肿瘤坏死因子-α单克隆抗体细胞凋亡细胞毒性拮抗剂
分类号：R392.11(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(30400405)天津市自然科学基金(05YFJZJC01200)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 13-16 )
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