E2F-1真核表达载体的构建和Genectin抗性细胞的筛选
王长青1
尹永硕2
李雷3
谢玉波3
肖强3
1.深圳市宝安人民医院,广东深圳,5181012.东莞市人民医院3.广西医科大学附属第一医院
摘要：目的 通过构建含E2F-1基因的真核表达载体,转染胃癌细胞MGC-803,获得Genectin抗性的稳定过表达E2F-1的胃癌细胞株.方法 PCR扩增E2F-1基因片段,经限制性内切酶 EcoRⅠ和Hind Ⅲ双酶切后将E2F-1定向克隆到真核表达载体pCMV-HA2中转化筛选.用脂质体Lipofectamine 2000将该载体转染MGC-803胃癌细胞,然后用含G418的培养基筛选获得具Genectin抗性的过表达E2F-1的胃癌细胞株.RT-PCR和Western blot技术检测MGC-803/E2F-1细胞内E2F-1表达情况.结果 重组载体pCMV-E2F-1-HA2经EcoRⅠ和Hind Ⅲ双酶切后得到预期片段,测序结果与报道的E2F-1基因完全一致.获取具Genectin抗性的细胞克隆,并进行了扩增.RT-PCR和Western blot证实重组载体pCMV-E2F-1-HA2成功转入胃癌细胞内,并稳定过表达E2F-1.结论 成功获取具Genectin抗性的稳定过表达E2F-1的胃癌细胞株,为下一步的功能实验奠定了基础.
关键词：E2F-1胃肿瘤MGC-803细胞转染
分类号：R735.2(消化系肿瘤)R73-35(肿瘤学实验研究)
资助基金：广西自然科学基金(0640085)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 19-21 )
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