以蛋白质磷酸酶CDC25A/B为靶标的抗癌药筛选体系的构建
李常虹1
张丽君2
赵翔1
张页1
1.北京大学基础医学院,北京,1001912.北京大学生命科学学院
摘要：目的 通过克隆和表达人蛋白质磷酸酶CDC25A/B融合蛋白,探讨构建高通量靶向抗癌药筛选体系的途径.方法 采用RT-PCR技术克隆人CDC25A/B催化区结构域cDNA序列,构建pGEX-4T-1-CDC25A/B原核表达质粒,表达和纯化携带还原型谷胱甘肽(GSH)标签的融合蛋白.以对硝基苯基磷酸盐(pNPP)为底物,在96孔板上建立分别以GST-CDC25A/B为靶标的筛选体系,应用维生素K3(VK3)进行验证性抑制剂筛选.结果 成功表达和纯化了GST-CDC25A/B融合蛋白,建立了相应的高通量磷酸酶抑制剂筛选体系.在相同反应条件下,GSTCDC25B对pNPP的水解活性是GST-CDC25A的6倍.VK3对CDC25A/B的半数抑制浓度(IC50)分别为0.8和1.8μg/ml.结论 通过表达和纯化CDC25A/B催化区结构域与GST的融合蛋白,可以高效率的建立靶酶抑制剂高通量筛选体系,为进一步研发VK3衍生物类新型靶向抗癌药奠定了基础.
关键词：靶向抗癌药CDC25磷酸酶GST融合蛋白高通量筛选对硝基苯磷酸盐
分类号：R979.1(药品)
资助基金：国家自然科学基金(30570413)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 8-11 )
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