人BMP2-IRES-HIF1αmu腺病毒表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达
李全营
李谌
郭威
吴秀成
王巍
刘丹平
1.辽宁医学院,辽宁锦州,1210002.辽宁医学院,辽宁锦州,1210003.辽宁医学院,辽宁锦州,1210004.辽宁医学院,辽宁锦州,1210005.辽宁医学院,辽宁锦州,1210006.辽宁医学院,辽宁锦州,121000
摘要：目的 构建人BMP2-IRES-HIF1 αmu腺病毒表达载体,并转染HEK293细胞,为下一步转染骨髓基质细胞和体内实验打下基础.方法 PCR扩增HIF1αmu片段,用BstXⅠ和XbaⅠ双酶切回收目的片段.pIRES2-EGFP用BstXⅠ和Xba Ⅰ进行双酶切后回收大片段.将上述回收的目的基因与载体片段连接,然后转化感受态大肠杆菌DH5α扩增；PCR扩增BMP2片段,用Nhe Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切后回收目的片段.把目的基因与载体片段连接,转化感受态大肠杆菌DH5α扩增重组腺病毒表达载体,通过酶切分析、PCR和测序进行鉴定.将构建好的质粒转染HEK293细胞,检测病毒液滴度.结果 构建了人BMP2-1RES-HIF1 αmu腺病毒表达载体,转染HEK293细胞见绿色荧光表达.结论 成功构建了人BMP2 -IRES-HIF1 αmu腺病毒表达载体,酶切分析及DNA测序证实质粒构建正确,质粒成功转染HEK293细胞,并见绿色荧光蛋白表达.
关键词：骨形态发生蛋白类低氧诱导因子基因工程重组腺病毒载体
分类号：R392.2(医学免疫学)
资助基金：辽宁省卫生厅“百千万人才工程”资助项目(2010921045)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 19-21 )
英文信息