pEGFP-C3-hNIS重组质粒的构建及其在人胃癌BGC-823细胞的表达
徐华
肖建英
刘超
张秀梅
高月
王翠瑶
1.辽宁医学院,辽宁锦州,1210012.辽宁医学院,辽宁锦州,1210013.辽宁医学院,辽宁锦州,1210014.辽宁医学院,辽宁锦州,1210015.辽宁医学院,辽宁锦州,1210016.辽宁医学院,辽宁锦州,121001
摘要：目的 构建人钠碘转运体( hNIS)基因真核绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C3-hNIS,并研究重组hNIS基因在人胃癌BGC-823细胞中的表达情况.方法 采用Trizol一步法从甲状腺手术患者的甲状腺组织中提取总RNA,利用RT-PCR方法扩增得到hNIS的可编码区基因,并克隆到T载体上,测序后亚克隆到真核绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C3的多克隆位点,获得重组真核表达载体pEGFP-C3-hNIS.分别将pEGFP-C3-hNIS重组质粒(实验组)和pEGFP-C3(对照组)瞬时转染至人胃癌BGC-823细胞中,转染48 h后,于荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白在细胞中的表达情况,并通过Western blot方法检测hNIS基因的蛋白表达水平.结果 序列分析证实克隆片段与GenBank公布的hNIS基因序列(序列号:NM-000453)相似性达99.90％.转染48 h后,实验组与对照组细胞均可观察到较强绿色荧光信号,用hNIS基因特异性抗体检测表明实验组hNIS表达水平明显高于对照组.结论 成功构建hNIS真核绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C3-hNIS,并能在人胃癌BGC-823细胞中高表达.
关键词：胃肿瘤人钠碘转运体基因克隆真核绿色荧光蛋白表达载体转染
分类号：R730.5(一般性问题)
资助基金：辽宁省教育厅重点实验室项目(LS2010101)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 1-3,6 )
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