Cbl-b shRNA稳定转染乳腺癌MDA-MB-231细胞系的构建
张凌云
石晶
滕月娥
张晔
曲秀娟
刘云鹏
1.中国医科大学附属第一医院,沈阳,1100012.中国医科大学附属第一医院,沈阳,1100013.中国医科大学附属第一医院,沈阳,1100014.中国医科大学附属第一医院,沈阳,1100015.中国医科大学附属第一医院,沈阳,1100016.中国医科大学附属第一医院,沈阳,110001
摘要：目的 构建靶向Cbl-b基因的短发夹环RNA(shRNA)真核质粒表达载体,建立Cbl-b shRNA稳定转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞系,为探讨Cbl-b的生物学功能奠定基础.方法 设计Cbl-b shRNA序列BLAST进行同源性分析.化学合成法合成shRNA序列,将配对的单链合成双链,以T4连接酶连接于pSilencerTM 4.1-CMV表达载体,加入感受态细胞.将菌液涂布于含有氨苄青霉素的LB平板,筛选阳性菌落,测序确认后进行大量复制、扩增,提取重组质粒.脂质体法将上述质粒转染至MDA-MB-231细胞中,G418持续压力选择和有限稀释法获得稳定转染的细胞系.结果 DNA测序证实靶向Cbl-b基因的shRNA真核质粒表达载体构建正确,G418压力筛选出阳性克隆,Western blot检测发现MDA-MB-231/Cbl-b shRNA转染细胞株中Cbl-b蛋白表达水平明显下调.结论 成功构建了基因沉默Cbl-b的MDA-MB-231细胞株,为进一步探讨其生物学功能奠定实验基础.
关键词：乳腺肿瘤Cbl-b短发夹环RNAMDA-MB-231转染
分类号：R73-3(肿瘤学实验研究)
资助基金：国家自然科学基金(30700807)辽宁省教育厅重点实验室项目(2008S246)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 31-33 )
英文信息