三种非病毒载体对神经母瘤细胞进行转染的效果比较
高聪
李威
梁兵
袁芳
谢富华
林哲聪
1.广州医学院第二附属医院,广州,5102602.广州医学院第二附属医院,广州,5102603.广州医学院第二附属医院,广州,5102604.广州医学院第二附属医院,广州,5102605.广州医学院第二附属医院,广州,5102606.广州医学院第二附属医院,广州,510260
摘要：目的 以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,研究Lipofectamine2000、改良纳米材料CS(N/P=10)和纳米粒子PAMAM( N/P=20)介导的基因导入系统对神经母瘤细胞SH-SY5Y的毒性及基因转染效率,为神经系统疾病的基因治疗奠定基础.方法 制备Lipofectamine2000、CS和PAMAM与质粒DNA (pDNA)的复合物,分别转染在体外培养的人胚肾细胞Hek293和SH-SY5Y,利用噻唑蓝(MTT)比色实验比较三种载体的细胞毒性作用、用激光共聚焦显微镜观察转染后的细胞形态、倒置荧光显微镜检测转染细胞EGFP表达强度、流式细胞仪检测转染效率.结果 ①Lipofectamine2000、CS和PAMAM转染细胞存活率在Hek293细胞分别为73.09％、73.69％、69.24％,三者比较无显著差异；在SH-SY5Y细胞分别为67.69％、61.71％、42.92％,前两者均显著高于后者(P均＜0.05).②Hek293细胞经Lipofectamine2000和CS与pDNA的复合物分别转染后,细胞形态均未发生明显改变,保持梭状生长；而PAMAM/pDNA复合物转染后,细胞发生皱缩,呈圆形分布生长.经三种载体转染后的SH-SY5Y细胞均发生形态改变,其中PAMAM/pDNA复合物转染者形态改变程度相对较大.Hek293细胞和SH-SY5Y细胞中,均以Lipofectamine2000/pDNA复合物转染者EGFP表达强度最大,其次为CS/pDNA复合物、PAMAM/pDNA复合物转染者.④Lipofectamine2000、CS和PAMAM的转染效率在Hek293细胞分别为60.9％、45.2％、42.7％,前者显著高于后两者(P均＜0.05)；在SH-SY5Y细胞分别为25.3％、19.2％、8.9％,前两者均显著高于后者(P均＜0.05).结论 Lipofectamine2000为目前最适于神经系统疾病基因治疗研究的非病毒载体；改良后的新纳米材料CS毒性比PAMAM小、转染效率比PAMAM高,有望在神经系统疾病研究中得到进一步运用.
关键词：阳离子脂质体新型纳米材料SH-SY5Y细胞基因转染效率
分类号：R742.3(神经病学与精神病学)
资助基金：国家自然科学基金(81100890)广东省自然科学基金(1015101820100022)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 8-11 )
英文信息