抑癌基因FATS真核表达载体的构建及其定点突变
闫双双
马克
仇丽
田寅
李政
1.天津医科大学附属肿瘤医院生化与分子生物学室,乳腺癌防治教育部重点实验室,天津市肿瘤防治重点实验室,天津3000602.天津医科大学附属肿瘤医院生化与分子生物学室,乳腺癌防治教育部重点实验室,天津市肿瘤防治重点实验室,天津3000603.天津医科大学附属肿瘤医院生化与分子生物学室,乳腺癌防治教育部重点实验室,天津市肿瘤防治重点实验室,天津3000604.天津医科大学附属肿瘤医院生化与分子生物学室,乳腺癌防治教育部重点实验室,天津市肿瘤防治重点实验室,天津3000605.天津医科大学附属肿瘤医院生化与分子生物学室,乳腺癌防治教育部重点实验室,天津市肿瘤防治重点实验室,天津300060
摘要：目的 构建抑癌基因FATS的真核表达载体和针对其单核苷酸多态性(SNP)位点定点突变的真核表达载体,为进一步研究其功能奠定基础.方法 通过RT-PCR从小鼠睾丸cDNA中扩增FATS基因,并克隆到p3 ×Flag-myc-CMV-26载体上,构建FATS真核表达载体p3×Flag-FATS；利用定点突变技术构建Hag-FATS-C213G,经测序检测突变结果后将两质粒分别转染FATS基因沉默的U20S细胞,Western blot检测FATS蛋白和标签蛋白表达.结果重组质粒p3×Flag-FATS经EcoR I/Kpn I双酶切出现质粒和目的片段两条带,且大小相符、无其他条带；编码FATS第213位氨基酸的第637-639位碱基由AAU突变为GAU,其他碱基均无突变；p3×Flag-FATS和Flag-FATS-C213G转染U20S细胞可检测出标签蛋白Flag和目的蛋白FATS表达.结论 FATS基因及其定点突变载体均可成功构建,且转染后表达良好；此为深入研究FATS基因的抑癌功能及与肿瘤发生风险的关系奠定了基础.
关键词：脆性位点相关的肿瘤抑制基因定点突变真核表达
分类号：R730.49(一般性问题)R730.231(一般性问题)
资助基金：国家重点基础研究发展计划(973计划)资助项目(2009CB526407)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 12-14 )
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